亚麻籽木酚素不同水解产物结构鉴定及活性研究

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1、DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringSTRUCTUREIDENTIFICATIoNoFDIFFERENTHYDROLYSATESoFTHELIGNANⅣ【ACRoMoLECULEANDACTIVITYSTUDYAuthor：YaqiFuMajor：FoodScienceandEngineeringSupervisor：ProfessorHongZhangDec．2013CollegeofFoodScienceandBiotech

2、nology’ZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310035，P．R．China浙江工商大学硕士学位论文亚麻籽木酚素不同水解产物结构鉴定及活性研究摘要亚麻籽又称胡麻，作为一种重要的油料作物广泛分布于中国华北、东北、西北高寒地区。因其含有大量的脂肪酸、亚麻酸、植物胶、蛋白质、食用纤维及维生素等，故在心血管疾病的防治、降低血液胆固醇、减少糖尿病、提高人体抗氧化水平减少结肠癌形成、防止肿瘤等方面起到重要的作用。亚麻木酚素是亚麻籽水解产物化学成分之一，是一种植物雌激素的生物活性物质，其在亚麻籽中含量非常丰富。其活性表现在

3、抗癌、抗真菌、预防糖尿病、抑制DNA和RNA合成作用、降低体内脂质过氧化水平、抗心血管疾病、抗病毒，因此广受专家学者的关注。本研究以亚麻籽为研究对象，通过60％乙醇提取亚麻籽中木酚素大分子化合物并采用碱解和木质素降解酶解两种不同水解方法对其大分子进行水解，建立反相液相色谱．紫外检测法(RP．HPLC／UV)和高效液相色谱．串联质谱法(HPLC／MS／MS)两种分析方法对亚麻籽木酚素大分子水解产物进行分离定量以及定性分析；比较了亚麻籽木酚素大分子化合物经碱水解和酶水解后所得水解产物个数，相同水解产物得率以及水解方法难易的差异性，选择出较优的水解方法并将

4、其水解产物运用于活性评价中；建立了一种新的梯度半制备液相色谱方法分离和收集不同木酚素水解产物馏分。将HPLC／MS／MS鉴定出T浙江工商大学硕士学位论文的4种不同馏分运用于抑菌活性，抗氧化活性以及抗癌活性评价中，为亚麻籽木酚素的利用和开发提供了参考。本文第一部分，首先以SDG标准品建立水解产物定量方法，求得标准曲线为y=3000000x．9174．33，据此分析比较60％乙醇和2MNaOH先后反应或者醇碱同时反应(63％乙醇：2MNaOH=7：3)提取水解亚麻籽木酚素，结果表明产物SDG的产率分别为7．69mg／g，4．56mg／g，因此选择先醇提后

5、碱解的水解方法；其次通过比较不同碱解浓度(0mM，lmM，2mM，5mM，10mM，25mM，75mM)下所得水解产物的液相色谱图以及水解产物CaAG，SDG，HDG，SDG+FeA／SDG+CouA，SDG+HMGA+CouA，SDG+HMGA，SDG+HMGA+FeA的得率，结果显示最佳碱解浓度为10mM。其中两种主要碱解产物SDG和SDG+CouA／SDG+FeA在10mMNaOH水解条件下的得率分别为25141mg／kg和56967mg／kg。采用HPLC／MS／MS总共定性出17种不同的碱解产物，单体化合物包括SDG、HDG以及CaAG，其

6、中有13种产物在二级质谱图中显示出清晰的碎片离子峰信息。最后考察了10mMNaOH作为最佳碱解浓度时分离所得水解产物的稳定性，其日内RSD％变化在O．61—4．51％之间，日间RSD％变化在1．13。9．89％之间。第二部分，首先通过比较三种不同酶浓度O．Olu／L，O．015u／L和O．02u／L下水解所得产物的得率，选择水解产物得率最大的O．015u／L作为最佳酶水解浓度梯度以及正交试验中酶浓度的中间值；随后通过正交实验优化酶水解亚麻籽木酚素条件得出酶浓度为O．015u／L，水解TT浙江工商大学硕士学位论文温度50℃，酶解时间4h时水解产物SDG

7、+HMGA+FeA的含量最大为1．48mg／g；通过HPLC／MS／MS分析方法鉴定出酶解产物共14种，单体化合物包括CaAG、CouAG、HDG、SDG，其中SDG+HMGA(1rdz=685．2[M—H+l一)和SDG(m／z=829．1M—Hq’)检测出碎片峰；比较了不同酶浓度下(0u／L，O．005u／L，O．01u／L，O．015u／L，O．02u／L，O．025u／L，O．03“L)亚麻籽木酚素水解产物的液相色谱图以及水解产物CaAG，HMGA+SDG，SDG+FeA，SDG+HMGA+CouA，SD(汁2HMGA+EtOH，HDG+HM

8、GA的得率，结果显示最佳酶水解浓度为0．025u／L。其中主要酶解产物CaAG和SDG+HMGA+CouA在