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《改良的新生猪胰岛细胞体外培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、湖南医科大学学报2001,26(6)508BULLHUNANMEDUNIVy改良的新生猪胰岛细胞体外培养1211罗贤明,祝和成,叶斌,王维(1.中南大学湘雅三医院放射科,长沙410013;2.中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙410008)-1[摘要]介绍一种通过细胞分离及体外培养获得大量新生猪胰岛细胞团的方法。新生猪胰腺经0.5~1mg.ml的V型胶原酶消化8~12min,再经体外培养7d,可获大量纯化的胰岛细胞团。同时,新生猪胰岛内的B细胞不仅胰岛素分泌功能良好,而且其超微结构正常。提示新生猪胰岛细胞可作为异种移植治疗1型
2、糖尿病重要的供体来源。*[关键词]胰岛;细胞;胰岛素;体外培养;猪,乳;方法+[中图分类号]R335.6[文献标识码]A[文章编号]10005625(2001)06050803InvitrocultureofmodifiedneonatalpigisletsLUOXianming,ZHUHecheng,YEBin,WANWei(DepartmentofRadiology,TheThirdXiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410013,
3、China)Abstract:Acellisolationandcellcultureinvitromethodwhichcanproduceamassofnew-bornpigisletlikeclusterswasintroduced.ThenewbornpigpancreaswereincubatedinVtypecollagenase(0.5~1.0-1mg.ml)for8~12minutes,andthenculturedinvitrofor7daysbeforelargeamountofhighlypu
4、rifiedporcineisletswereproduced.Theneonatalpigisletshadgoodinsulinsecretionandnormalsub-cellstructure.Theresultssuggestthattheneonatalpigisletsareprobablyafinedonorsourceforclinicalxenotransplantationofislets.Keywords:islandsoflangerhans;cells;insulin;cultureinvitro;s
5、wine,miniature;methed[BullHunanMedUniv,2001,26(6):050803]多年来的研究证明,胰岛移植不失为治疗1型1.2.1新生猪胰岛细胞的分离、纯化和培养将新-1[1]糖尿病的一种有效方法,足够数量的细胞移植是胰生猪用氯胺酮(17mg.kg)麻醉后,于无菌状态岛移植成功的关键因素之一。虽然人胚胎胰岛移植下剖腹取出胰腺,用含抗生素的D-Hanks液清洗3取得了一定的治疗效果,但受到胚胎供体不足以及次去除血液并仔细去除肉眼所见的胰腺外组织、导难以及时分离培养而不能保证其活性的限制。猪胰
6、管、结缔组织和淋巴组织。然后将胰腺剪成0.5~13岛素由于其结构与人胰岛素十分相似,且新生猪胰mm大小组织碎片,再用DHanks液清洗3次后,腺来源广泛且价格低,采用新生猪胰腺作为供体可置入50ml锥形瓶中,加入新鲜配制的浓度0.5~1-1以弥补供体不足的缺陷。笔者对新生猪胰岛细胞群mg.ml的V型胶原酶(按组织碎片自然沉降压积的生成的方法进行了初步的研究,现将研究结果报告8~10倍加入),37水浴中振荡消化7~9min后,加如下。入40ml冷D-Hanks液(4)终止消化,用手剧烈振荡锥形瓶后待较大的组织块沉淀后将上清液移入1
7、材料与方法50ml离心管中,加入5~8ml小牛血清,混匀后再低-11.1材料速(800r.min)离心得沉淀细胞待培养。残余组织1.1.1动物1~5日龄合格新生猪,体重1.6~2.2块沉淀物中再加入D-Hanks液充分振荡后吸取上kg,冠尾长20~22cm,雌、雄各半。清液离心,该过程重复2~3次将第一次消化能分离1.1.2试剂RPMI1640购自美国Sigma公司,0.5~1的细胞尽量分离出来,避免进入第二次消化过程。-1mg.mlV型胶原酶购自美国Sigma公司,胰岛素放射第一次消化后所剩的组织块再进行第二次消化,这免
8、疫试剂盒购自成都华西糖尿病科研所,小牛血清和D样反复2~3次至组织块完全消化,仅剩下少量白色-Hanks液由我校肿瘤研究所细胞中心提供。条索状纤维组织。将分离的细胞加入含20%小牛血-1-11.2方法清、青霉素100
