影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素

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1、9期张莉等：影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素1895影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素张莉，冯书堂（中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，基因与细胞工程研究室，北京100094）摘要：卵母细胞是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分，它是体外受精、性别控制、克隆及转基因等技术成功与否的前提和关键。影响猪卵母细胞体外成熟的因素很多，本文将从物理因素和化学因素两方面作简要综述。关键词：猪；卵母细胞；体外成熟；物理因素；化学因素FactorswithinvitroMaturationofPorcineOocyte

2、sZHANGLi，FENGShu-tang（DepartmentofGeneandAnimalCellEngineering,InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100094）Abstract:Oocyteinvitromaturationplaysanimportantroleinembryonicengineeringsuchasinvitrofertilization,nucleartran

3、sfer,sexcontrol,cloningandgenetransfer.Theinvitromaturationofporcineoocytesisthecrucialstepandpreconditioninembryoproduction.Itisaffectedbyvariousfactors.Inthisstudy,physicalandchemicalfactorsinvitromaturationofporcineoocytesarediscussed.Keywords:Porc

4、ine;Oocyte;invitromaturation;Physicalfactors;Chemicalfactors9期张莉等：影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素1895猪胚胎工程已极大地推进了畜牧业和医学的进程，通过它可以改良品种、培育抗病猪种、提高肉质、生产转基因猪或基因组修饰猪、制备人类疾病模型、进行器官移植、生产药物蛋白、研究发育机理等。卵母细胞体外成熟是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分，是胚胎体外生产的上游环节，其质量的优劣和成熟率很大程度上决定了后期的结果。体外卵母细胞无论是成熟还

5、是受精后支持发育的能力都比体内差，这说明体外成熟培养环境还远未达到体内的生理水平[1]。影响猪卵母细胞体外成熟的因素很多，本文拟通过综述物理因素和化学因素，以期和同行们共同探讨，摸索猪卵母细胞体外成熟的最佳培养体系和条件，为猪胚胎工程提供技术。1物理因素1.1卵巢来源猪的品种、年龄及健康状况猪的品种、年龄及健康状况不同，其卵母细胞的质量和体外成熟培养的效果亦不同。一般来讲，不同国家和地区，猪种之间都会存在因遗传背景、特定的气候条件、饲养环境及方式和营养水平的不同而造成品种品质上的差异，从而导致卵母

6、细胞质量的差异[2]。而从同一品种猪抽取不同猪的卵泡卵母细胞，其培养效果也会因为各个猪的年龄、健康状况、卵巢形态的不同而不同。比如，处在育龄盛期的健康成年母猪，其卵巢体积大，有黄体，颜色也较深，卵巢表面卵泡多而且直径在3～6mm的卵泡所占比例相对较高，抽得的卵母细胞形态完好，裸卵少，体外成熟培养效果也好。反之，取自仔猪、青年猪、老母猪及老弱病残猪的卵母细胞体外成熟培养效果较差。1.2卵巢离体时间通常情况下，卵巢离体时间越短越好，也就是尽可能及早地将卵母细胞抽出进行培养，目前比较公认的卵巢离体时间应

7、在3～4h之内。但实际上，因为各种主观和客观因素的限制，卵巢离体时间往往超过3h9期张莉等：影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素1895以上，这就使卵母细胞的生存环境受到一定的应激，从而影响其进一步发育。文国艺等报道[3]，母猪卵巢离体时间的长短直接影响卵母细胞的体外成熟及卵裂率，卵裂率将随着卵巢离体时间的增加呈降低的趋势。1.3卵巢回收温度不同于其它哺乳动物，猪卵子对温度特别敏感，如果送回实验室的卵巢温度过高或过低，都会影响卵母细胞的体外成熟培养效果，一般比较适宜的卵巢送达温度范围是32～35℃。夏

8、季室内外温度都较高，因此温度相对容易控制；但冬季的昼夜温差大，室内外温度也较低，因此，卵巢温度的控制就显得尤为重要。文国艺研究了卵巢保存温度对猪体外受精的影响[3]，发现当卵巢回收温度低于25℃，猪的卵母细胞将受到低温应激；温度还将通过影响猪卵母细胞的体外成熟继而影响到体外受精，当卵巢回收温度为36～39℃、25～28℃、14～17℃时，猪体外受精的卵裂率分别为52.3%、49.8%、28.8%。1.4卵巢的质量及卵泡的大小采自不同或相同卵巢上卵泡的大小都不一样，目前将卵巢卵泡按直