微拟球藻诱变育种及高脂藻株筛选方法研究

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1、谨以此论文献给我的家人和老师！------曲晓梅1微拟球藻诱变育种及高脂藻株筛选方法研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：2独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------

2、------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：3微拟球藻诱变育

3、种及高脂藻株筛选方法研究摘要随着世界经济发展，化石能源消耗日益加剧，环境问题不断凸显。为推进经济社会可持续发展，必须加快转变发展方式、优化能源结构，开发资源节约、环境友好的新型能源。微藻是水域生态系统的初级生产者，具有种类繁多、结构简单、生长迅速以及含油量高等特点，近年来，利用微藻制备生物柴油已成为全世界研究的焦点。但是，由于多方面原因，微藻制备生物柴油至今仍未能实现工业化生产，其制约因素之一是缺乏优良的种质资源。微拟球藻（Nannochloropsisoceanica）生长速度快、油脂含量高、抗逆性强，是极具开发潜力的优

4、良藻种。本文以研究室保存的微拟球藻（N.oceanica）藻种（编号为CS-179）为材料，经过分离纯化开展了诱变育种研究，得出以下结果：1.研究了乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂精喹禾灵筛选高脂微藻的可行性，发现7.5mol/L精喹禾灵可抑制99.7%的微拟球藻生长，10mol/L精喹禾灵完全抑制微拟球藻生长，确定了其有效性。以7.5mol/L精喹禾灵筛选获得两个藻株KA1和KA2，经52天培养后，其总脂含量分别达干重的46.73%和38.60%，比出发藻株分别提高了29.02%和6.57%。KA1的比生长速率和终生

5、物量与出发藻株无显著差异,但其油脂产率比出发藻株显著升高。2.利用浓度为50mM的化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）对微拟球藻进行诱变处理，并用精喹禾灵作为筛选压进行高脂诱变藻株筛选，获得了KE75B1和KE10A1两个高脂藻株，其总脂含量分别占细胞干重的44.19%和43.51%，比出发藻株（总脂含量占细胞干重的39.34%）分别提高了12.35%和10.62%（P<0.05），且KE75B1藻株的油脂产率也较出发藻株提高18.07%（P<0.05）。3.探索了尼罗红微波助染法筛选高脂微拟球藻诱变藻株的有效性，结果表明：利

6、用DMSO预处理样品，在微波加热45s和15s时，尼罗红染色的效果最佳。以此方法筛选获得了三株荧光强度较出发藻株显著提高的诱变藻株，经氯仿-甲醇提总脂法进行验证，诱变藻株E232和E234的总脂含量占其细胞干重的百分比分别较出发藻株提高了13.04%和16.39%（P<0.05），诱变藻株E225虽然差异不显著（P>0.05），但也较出发藻株升高了10.78%，证明了该高通量筛选方法的可行性。i综上所述，本研究证明了以甲基磺酸乙酯（EMS）进行高脂微拟球藻诱变育种的有效性，确定了精喹禾灵作为筛选压筛选高脂微拟球藻的可行性，

7、探明了尼罗红微波助染高通量筛选高脂微拟球藻的基本条件，为发展微拟球藻诱变育种提供了参考。关键词：微拟球藻；EMS；诱变；精喹禾灵；尼罗红微波助染；总脂iiMutationbreedingoftheNannochloropsisoceanicaandthescreeningtechniqueofthemicroalgaerichinlipidAbstractAlongwiththedevelopmentoftheworldeconomy,fossilenergyconsumptionincreasing,theenviron

8、mentproblemscontinuetohighlight.Inordertopromotethesustainableeconomicandsocialdevelopment,wemustspeedupthetransformationdevelopmentwaytooptimizetheener