小麦tawrky7基因的克隆、表达及其遗传转化研究

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1、分类号学号M201171526学校代码10487密级硕士学位论文小麦TaWRKY7基因的克隆、表达及其遗传转化研究学位申请人：冯莹学科专业：生物化学与分子生物学指导教师：汪越胜副教授答辩日期：2014年1月19日万方数据AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceIsolation,ExpressionAnalysisandGeneticTransformationoftheTaWRKY7GeneinWheat(TriticumaestivumL.)Candid

2、ate：YingFengMajor：Biochemistry&MolecularbiologySupervisor：Prof.YueshengWangHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaJanuary,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学

3、位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据华中科技大学硕士学位论文摘要WRKY蛋白是一类转录因子超家族，它们含有保守的WRKY结构域，该结构域可以与DNA上的W盒

4、结合，从而激活或抑制特定基因的表达。WRKY转录因子的调节作用几乎贯穿了植物的整个生长发育过程，如种子的萌发、植株的生长发育、衰老以及对生物和非生物逆境的响应等。但是WRKY转录因子具体的调节机制还不是很清楚。本研究利用DFCI数据库中的小麦EST序列拼接得到小麦TaWRKY7基因的序列信息，并以小麦cDNA为模板，通过常规基因克隆技术克隆得到该基因。利用生物信息学方法，进行ORF的预测、蛋白质的序列和结构预测、蛋白质各种理化性质分析、同源性分析等。发现目的基因与HvWRKY7同源性较高，在97%的区域有94%的同源性，因此我们将目的基因命名为TaWRKY7；该基因翻译的蛋白质含

5、有1个WRKY结构域，锌指结构类型为C2H2，属于Ⅱ类WRKY转录因子。通过半定量RT-PCR分析TaWRKY7基因在小麦幼苗不同组织和不同非生物胁迫条件下的表达模式，推测其可能响应的逆境胁迫类型及参与的信号通路，结果表明：该基因在小麦叶片中的表达量最高，其次是根，茎中的表达量很低；在NaCl（200mM）、PEG（20%）、ABA（100µM）和低温（4℃）胁迫处理下，TaWRKY7对NaCl有响应，在NaCl处理下其表达明显上调。另外还构建了真核细胞表达载体pAHC25-TaWRKY7，利用基因枪介导的遗传转化方法将其转入郑麦9023盾片中，通过组织培养获得再生苗，然后对再生

6、植株进行分子鉴定，共获得6株TaWRKY7过表达植株。本研究为进一步探索TaWRKY7在小麦生长发育过程中所参与的信号调节途径及其发挥的生物学调节作用奠定了坚实的基础。关键词：TaWRKY7；基因克隆；非生物胁迫；RT-PCR；遗传转化I万方数据华中科技大学硕士学位论文AbstractWRKYtranscriptionfactorsarenamedaftertheconservedWRKYdomain.TheycanregulatetheexpressionofcertaingenesbybindingtotheW-boxwhichislocatedinthepromoterre

7、gionoftargetgene.WRKYproteinsareinvolvedintheentireprocessofplantgrowthanddevelopment,suchasseeddormancyandgermination,senescence,bioticstress,abioticstress.WhilethedetailregulationmechanismofWRKYproteinsremainsunknown.Inthisresearch,theseque