斐林试剂和双缩脲试剂应该如何使用

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1、斐林试剂和双缩脲试剂应该如何使用--------一道高考试题带来的思考人教版必修1《分子与细胞》中斐林试剂为质量浓度为0.1%NaOH和0.05%CuSO4组成，使用时两者先要1:1混合；双缩脲试剂为质量浓度为0.1%NaOH和0.01%CuSO4组成，使用时先要加双缩脲试剂A液（0.1%NaOH）1ml，再滴加3-4滴双缩脲试剂B（0.01%CuSO4）。笔者在看到2017年一道高考试题的D选项时产生了疑问，高考试题如下：[2017全国I卷]2.下列关于细胞结构与成分的叙述，错误的是（）A.细胞膜的完整性可用台盼蓝染色色法进行检测B.检

2、测氨基酸的含量可用双缩脲试剂进行显色C.若要观察处于细胞分裂中期的染色体可用醋酸洋红液染色D.斐林试剂是含有Cu2+的碱性溶液，可被葡萄糖还原成砖红色疑问：既然斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同，原理都是碱性条件下的Cu2+与还原糖和蛋白质反应，那么在检测还原糖和蛋白质时斐林试剂和双缩脲试剂能否互换使用，与加入NaOH和CuSO4的量和先后顺序有无关系呢？为了解答疑问，笔者分别做了还原糖和蛋白质的检测实验。一、还原糖的检测待测组织样液：早酥梨研磨液实验步骤与实验结果：组别12345678组织样液2ml早酥梨研磨液检测试剂0.1%NaOH和0.

3、05%CuSO40.1%NaOH0.01%CuSO40.05%CuSO4试剂用量0.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；4滴CuSO44滴NaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；1mlCuSO41mlCuSO4试剂使用顺序NaOH和CuSO4混合先加NaOH后加CuSO4先加CuSO4后加NaOHNaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合

4、条件50~65℃水浴加热现象砖红色沉淀砖红色沉淀砖红色沉淀砖红色沉淀（颜色浅）砖红色沉淀棕色砖红色沉淀（颜色浅）蓝色结果分析：1.从1、2、3组实验结果来看斐林试剂中无论NaOH和CuSO4混合使用，还是先加NaOH后加CuSO4，或者先加CuSO4后加NaOH都会出现砖红色沉淀，并且颜色差异不明显；2.比较1、4、5组结果，CuSO4的用量对颜色深浅的影响较大，而NaOH的用量对颜色影响不明显；3.分析1、6、7组结果，适当提高质量浓度为0.01%CuSO4的用量也可以出现砖红色沉淀。结论：1.用斐林试剂和双缩脲试剂都能检测还原糖；2.

5、检测还原糖时与NaOH和CuSO4使用顺序没有太大关系；3.如果不营造碱性环境，不会出现砖红色；1.在碱性环境中，如果Cu2+的浓度过低，不会出现砖红色，随着Cu2+浓度的提高逐渐出现砖红色，并且颜色会逐渐加深。二、蛋白质的检测待测组织样液：蛋清稀释液实验步骤和实验结果：组别1234567组织样液2ml蛋清稀释液检测试剂0.1%NaOH和0.01%CuSO40.1%NaOH0.05%CuSO40.01%CuSO4试剂用量1mlNaOH；2滴CuSO40.5mlNaOH；2滴CuSO43滴NaOH；2滴CuSO41mlNaOH；2滴CuSO

6、41滴NaOH；2滴CuSO43滴NaOH；2滴CuSO42滴CuSO4试剂使用顺序先加NaOH后加CuSO4NaOH和CuSO4混合先加CuSO4后加NaOH先加NaOH后加CuSO4混合先加CuSO4后加NaOH先加CuSO4后加NaOH现象紫色紫色紫色紫色（深）紫色（深）紫色（深）蓝色现象分析：1.从第7组结果得出如果不制造碱性环境，不会产生紫色；2.1、2、3组比较只要能制造碱性环境，都能出现紫色，与NaOH和CuSO4的添加顺序无关；3.从4、5、6组可以看出斐林试剂也能检测蛋白质，而且紫色要比1、2、3组要深。结论：1.斐林试

7、剂和双缩脲试剂都能检测蛋白质；1.无论先加NaOH还是先加CuSO4或者两者混合加入都能产生紫色；2.使用0.05%CuSO4要比使用0.01%CuSO4产生的紫色颜色更深，更接近于蓝色。原理分析：在碱性条件下，Cu2+氧化性增强，能够氧化还原糖中的醛基，同时Cu2+被还原为砖红色的Cu2O沉淀，只要保证营造碱性条件，有足够多的Cu2+被还原为Cu2O就能出现砖红色沉淀。双缩脲试剂原本是检测双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）的试剂，而蛋白质中的肽键（-CO-NH-）的结构和双缩脲的结构非常相似，在碱性条件下与Cu2+产生紫色的络合

8、物，所以可以用双缩脲试剂检测三肽或三肽以上的化合物，在碱性条件下Cu2+与蛋白质中的肽键形成紫色的络合物。实验综合分析：1.斐林试剂和双缩脲试剂都能检测还原糖和蛋白质；2.在检测还原糖时如果用