不同体外培养体系对胚胎发育的影响

《不同体外培养体系对胚胎发育的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学博士学位论文不同体外培养体系对胚胎发育的影响姓名：戴善军申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：乔玉环；孙莹璞；千日成201203摘要不同体外培养体系对胚胎发育的影响博士研究生：戴善军导师：乔玉环孙莹璞千日成教授郑州大学第一附属医院生殖医学中心中国郑州450052摘要胚胎质量是影响体外受精(invitrofertilization，IVF)结局的重要因素。而胚胎在生长发育过程中所处的局部微观环境对胚胎质量发挥着决定性作用。胚胎培养微环境最主要的构成部分就是体外培养体系。如何建立最适宜胚胎生长发

2、育的体外培养体系，是目前辅助生殖技术(assistedreproductivetechnologies，AI玎)领域研究的热点之一。近些年来，随着对培养微环境研究的进一步深入和认识的逐渐加深，体外培养体系被不断地改良更新。目前主要采用的是矿物油或者石蜡油覆盖的微滴培养系统培养胚胎。国内外许多研究证实哺乳动物胚胎体外培养时，群组法培养要比单胚法培养获得更高质量的胚胎。然而发生机制仍然不清，可能与胚胎发育过程中自身分泌因子的相互作用有关。然而这些研究大多是数十年前进行的，最近几年培养基和培养体系都有了很大幅

3、度的更新，体外培养胚胎质量和妊娠结局得到很大的改善。在现有的新培养条件下，体外受精胚胎是单独培养或还是群组培养，胚胎质量是否会受到培养体积和密度的影响等依然不明。尽管数量众多的胚胎群组共同培养可能有助于胚胎发育，但这仅仅是用于实验研究，并且群组培养无法追踪个体胚胎的发育情况。商业化的培养系统或者人胚培养系统多要求胚胎单独培养或者小数量胚胎群组培养。为了克服这些问题，Vaita等开发了微孔(the-weU．of-the-well，wow)培养系统，为单独培养的胚胎提供了半开放的培养微环境。微孔培养系统不仅

4、稀释了胚胎发育过程中堆积的代谢产物的毒性作用，而且还将胚胎自分泌或者旁分泌的生长因子聚集在摘要每个微孔内的胚胎周围，进而促进胚胎发育。目前关于微孔系统应用于胚胎培养的研究相对较少，并且多集中于单微滴多微孔多胚胎培养研究，单微滴单微孔单胚胎培养未见报道，特别是对于超微滴体积下微孔培养系统对于胚胎发育的影响、微孔培养系统对玻璃化冷冻前后胚胎细胞凋亡的影响未见报道。从卵巢中获取未成熟卵，在体外适宜的微环境和培养条件下培养成熟，从而具备受精和胚胎发育能力，即为卵母细胞体外成熟(invitromaturation

5、．IVM)技术。基础研究和临床实践发现，ⅣM来源的胚胎质量差，囊胚形成率低，植入能力下降，妊娠结局欠佳。究其原因，可能与卵母细胞在体外培养时胞核和胞浆成熟不同步、卵子质量较差有关。在研究中发现，卵母细胞和其周围的颗粒细胞通过内分泌、自分泌、旁分泌的方式相互影响，相互作用。颗粒细胞分泌一些可溶性的营养物质促进胞核和胞质的成熟。是否可以利用WOW系统体外培养未成熟卵子以提高卵子质量依然不明确，相关研究未见报道。微滴法群组培养有利于提高胚胎的发育潜能，但是该培养方法无法追踪胚胎的个体发育，同时过高的胚胎密度也

6、容易导致代谢产物的堆积而增加培养微滴的毒性。微孔系统培养仍处于实验研究阶段，培养条件仍需要摸索。而且目前商品化的微孔培养用皿形式单一、规模较小，因此大多数生殖中心仍选择单胚微滴法培养人的胚胎。传统的单胚微滴法培养面临着很多挑战，长时间的精卵孵育可以导致许多毒性物质的堆积，阻碍早期胚胎的发育。许多研究提出，IVF技术改良之一的选择就是缩短受精时间，从16．18d,时缩短至1-4小时。对于缩短精卵共孵育时间是否有利于胚胎发育仍存在争议。本研究通过改变小鼠早期胚胎在微滴培养系统中的微滴体积、胚胎密度观察评估胚

7、胎发育结局；微孔培养系统培养早期胚胎获得囊胚行玻璃化冷冻，观察冷冻前后囊胚细胞凋亡率的变化并评估技术安全性；微孔系统培养未成熟卵子并进行后续胚胎培养，观察评估微孔系统对卵子和胚胎的发育潜能的影响；人胚胎单胚培养系统中缩短精卵共孵育时间观察胚胎发育和妊娠结局等探索不同的体外培养体系对胚胎发育的影响。经查新未见相同报道。Ⅱ摘要第一部分：不同体积和胚胎密度的微滴和微孔培养系统对早期鼠胚发育的影响研究目的：探讨早期小鼠2细胞胚胎的最佳培养微滴体积和胚胎密度，并评估胚胎共培养时间以及WOW培养系统对胚胎质量的影响

8、研究方法：(1)9个／微滴2细胞鼠胚分别在6．25、12．50、25．00和50．00肛l微滴中培养；(2)3、6、9和12个2细胞鼠胚在50pl微滴中培养；(3)9个／微滴2细胞胚胎在50pl的微滴中共培养Oh、24h、48h、72h、96h；(4)9个／微滴2细胞胚胎分别在50pl微滴和WOW系统中培养，单个鼠胚分别在5．5pl的微滴和WOW系统中培养。(5)单个2细胞鼠胚在l、2、5．5¨l体积的WOW系统中培养。所有分组比较囊胚形成