穿膜肽介导纳米银抗肿瘤应用的初步研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterThePrimaryResearchonAntitumorApplicationofSilverNanoparticlesMediatedbyCellPenetratingPeptideByJinhuaLiuSupervisor：AssociateProf．YongxingZhaoProf．YongzhuoHuangPharmaceuticsSchoolofPharmaceuticalScienceApril2012学

2、位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位做懈刘金华纠垒哗勿fl每兰司瑚日期：袋瞩■}于调h中目学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和

3、借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文懈刘金华富·净孕孑功p匀乡目汐曰日期：∞帕年—0}旧摘要目的：探索并验证纳米银(SilverNanoparticles，AgNP)的抗肿瘤活性，为恶性肿瘤的治疗寻找新的行之有效的方法。目前，已有研究证实纳米银的体外，抗肿瘤活性，尤其是粒径在10nm以下的纳米银粒子的

4、抗肿瘤效果尤为明显。方法：利用化学还原法制备纳米银，通过单因素实验优化制备条件，为了改善纳米银穿过细胞膜的能力，在纳米银表面修饰穿膜肽(TAT)，制备得到经过TAT修饰的纳米银粒子(AgNP．TAT)。采用激光纳米粒度仪测定AgNP及AgNP．TAT的粒径和电位；用透射电子显微镜考察AgNP及AgNP-TAT的形态及分散均匀度；使用热重分析仪和二奎琳甲酸法对连接到纳米银表面的TAT进行定性和定量分析；使用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪考察细胞对AgNP及AgNP．TAT的摄取效率；使用MTT法考察AgNP及AgNP．TAT对肿瘤细胞

5、和正常细胞的增殖抑制效果；最后用nu／nu裸鼠的黑色素瘤模型考察AgNP及AgNP．TAT对黑色素瘤的抑制效果，并通过给健康nu／nu裸鼠后肢肌肉局部注射AgNP及AgNP．TAT考察AgNP及AgNP—TAT的局部刺激性。在所有的细胞及动物实验中均采用盐酸盐阿霉素作为阳性对照。结果：影响纳米银粒径的因素主要有：硝酸银和硼氢化钠的比例以及表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮k．30的用量，制备过程中的搅拌速度，搅拌时间等。通过处方优化最终制备出了粒径10nm以下的纳米银，并通过Ag．S共价键在纳米银表面修饰上了TAT。细胞实验结果显示，AgN

6、P及AgNP．TAT对多种肿瘤细胞的增殖都有一定的抑制作用，且AgNa．TAT的抑制效果显著强于AgNP，但是两者均对非肿瘤细胞系293．T细胞基本没有毒性。动物实验结果显示，AgNP-TAT对裸鼠黑色素肿瘤的抑制率达到90％，且与ADR相比其毒副作用明显降低。结论：本研究制备的粒径10nm以下的纳米银体内体外实验均表明有较强的抗肿瘤效果，且修饰W盯后其抗肿瘤效果得到了明显的提高，AgNP一驰盯的体内体外实验均表现出了极具前景的抗肿瘤效果，而且AgNP—TAT的毒副作用要比盐酸盐阿霉素小很多。在细胞实验中AgNP．TAT对耐阿霉素

7、的人乳腺癌细胞也表现出了很好的抗肿瘤效果，因此AgNP．TAT有可能成为将来治疗肿瘤尤其是多药耐药肿瘤的一种行之有效的药物。摘要关键词：纳米银；穿膜肽：阿霉素；多药耐药；抗肿瘤AbstraetAbstractObjective：Thepurposeofthisstudywastoinvestigatetheanti—tumoractivityofsilvernanoparticles(AgNP)tosearchfornewtherapeuticapproachesforcancer．Currently,ithasbeenrepor

8、tedthatAgNPpossessedinvitroanti-tumoractivity,especiallytheonelessthan10nminsize．Methods：AgNPwaspreparedusingchemicalreducti