一株地方株prrsv分离鉴定及gp5基因疫苗研究

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1、山东农业大学硕士学位论文一株地方株PRRSV分离鉴定及GP5基因疫苗研究姓名：曹广明申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：常维山20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要猪繁殖与呼吸综合征(PorCinerel瑚dl埘ve髓drespimtorys)rIldroIne，PRRS)是一种以引起各种年龄猪呼吸道疾病和母猪繁殖障碍为特征的传染病，其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，是危害养猪业的主要疾病之一。目前，世界上流行的PRRSV基因型主要有以LV株为代表的欧洲型和以VI也332株为代表的美洲型。自1996年，PRRSV在我国被分离得以来，在我国流行呈蔓延趋

2、势。2006年我国部分地区还暴发了高致病性猪蓝耳病，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。试验分为两部分：1、PRRSV．SDDP株的分离鉴定及全基因组序列分析2009年在实验室临床病例诊断过程中分离得到一株猪繁殖与呼吸综合症病毒(SDDP株)，参考美洲型代表株(v102332)及近几年国内分离得到的毒株设计了13对引物对其全基因组进行了克隆测序、系统进化树分析。结果显示，SDDP．PⅪ峪V株属美洲型PI派SV，与高致病性P硒塔V代表株SX．1、Ⅸ143、JXAl的同源性在98．7-99．7％，非结构基因NSP2的变异性最大，与美洲代表VI匕332存在90个核苷酸的缺失(位于NSP2

3、核酸序列的1540．1542、1594．1680)，这与2006年来分离得到的毒株相似。结构基因OI心6、7的相对保守。SDDP分离株与国内其他分离株相比呈现出一定的新特性，为高致病性蓝耳病的防治提供理论依据。2．不同分子佐剂对P砌峪V-GP5核酸疫苗免疫效果影响的研究基因疫苗主要是由真核表达载体和保护性抗原基因构成的，与传统疫苗相比较，具有设计灵活、安全性高、性质稳定、成本低、同时诱导体液免疫和细胞免疫等优点。然而核酸疫苗同时存在抗体产生慢且水平低的问题，需要加入有效的佐剂才能克服这些缺点，国内外学者一直在探索进一步提高基因免疫效果的方法，其中在基因免疫表达载体中引入调节分子是

4、其中重要的措施之一。试验中选取补体C3d、干扰素诱导蛋白10(m．10)，法氏囊三肽(BS)，胸腺五肽(TP)作为分子佐剂与PRRSV的保护性抗原GP5构建到表达载体pcDNA3．1中，大量提取重组质粒，转染293T细胞，经间接免疫荧光证明重组质粒能在细胞内表达。重组质粒免疫小鼠，通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL．4和IFN．丫的水平，结果显示，抗体效价、IL．4和IFN吖含量均比对照组高，在分子佐剂组中以pcDNA3．1．IP．10．GP5组的效果最好，与空白对照及PCDNA3．1．GP5组比较差异均显著(P

5、因疫苗研究粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平，IP．10分子佐剂能显著增强PI汛SVGP5基因的免疫效果。关键词：PI汛sV，全基因，GP5核酸疫苗，分子佐剂，免疫效果II山东农业大学硕士学位论文————————————————————————————————————————————————一IsolationandIndentificationofaLocalStrainofPRRSVandResearchofGP5GenicVaccinesAbstractPorCinereproductiveandrespira【呻syndrome(PRRS)isacontagio

6、llSdiseaSccausedbyporcine掣ductiVeandrespi咖驴dr0眦Vinls(PRRSV)．PRRSmailllyc棚edreproductivedisorderandporcinerespiratoDr跚妇eatVariet)rofages．TheVimsisclassifiedinto2t)，pes，勺lrpeI(Europ锄)andt)，：peII(NormAm耐can)based0ntllegenetic锄d砌igenicdi行erences锄ong恤PI汛SVStmi硒．hll996，Gu0Baoqingfirstisola蜘aPI汛SVs臼

7、面n舶mabomdf．etusesandVeri舶d也e嘶denceofPIU峪Vinourco啷Atthepresent，PRRShaSprevailedintl圮mainwodilwhnepig-raisingcouI】向yanddistrictsandcausedpig—raisingla唱eeconomiclossesinⅡ圮wodd．TllissubjeCtcallbediVidednot量ll优parts：1Isolationandsequence觚alysisofP