戊四氮诱导的母源性癫痫发作糖原合成酶激酶-3β在出生前脑组织中的表达

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1、河北医科大学硕士学位论文戊四氮诱导的母源性癫痫发作：糖原合成酶激酶--3β在出生前脑组织中的表达姓名：栾绍群申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：王维平201203中文摘要戊四氮诱导的母源性癫痫发作：糖原合成酶激酶-313在出生前脑组织中的表达摘要目的：据估计0．5％的妊娠妇女是癫痫患者。妊娠期间癫痫发作对孕妇的主要危险：一是，大约有1／3的孕妇发作频率较前增加；二是，母源性并发症对胎儿尤其是对胎儿脑的影响。癫痫母亲的孩子出生时阿普加评分低于同龄儿，而围产期死亡率却高于同龄儿。不同的研究者观察到服用抗癫痫药和未服用抗癫痫药的癫痫孕妇的

2、胎儿宫内发育迟滞率均较高，表明母源性癫痫可能直接影响胎儿的发育。然而，癫痫性病症的详细机制及潜在的影响尚不明确。本文通过给予腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazol，PTZ)慢性点燃Sprague．Dawley(SD)雌性大鼠，点燃成功后与雄性SD大鼠合笼。妊娠大鼠继续给予戊四氮以诱导癫痫发作(35mg／kgPTZ15天)。运用WesternBlot方法测定胚胎15．5天脑组织中糖原合成酶激酶．3p(Glycogensynthasekinase．3p，GSK．3p)、磷酸化的糖原合成酶激酶．3p(P．GSK．3p)蛋白表达水平。

3、运用免疫组织化学方法测定胚胎15．5天脑组织中磷酸化的糖原合成酶激酶．3p(P．GSK．3B)蛋白表达水平及分布。方法：通过每天给予腹腔注射PTZ建立慢性点燃癫痫模型。将雌性SD大鼠45只(7．8周，起始体重200-士20g)随机分为癫痫组(PTZ组)，盐水组(NS组)和正常对照组(NC组)，每组大鼠15只。自实验第一天起，PTZ组大鼠每天上午9：00腹腔注射PTZ35mg／l(g，直到点燃。第二组动物给予腹腔注射相应计量的生理盐水。正常对照组不给任何处理。每次给予PTZ注射后立刻观察45分钟，按照Becker等改良的Racine分级标准

4、：0级，无任何异常反应；1级，耳朵抖动和颜面部的搐动；2级，肌阵挛性发作但未站立；3级，肌阵挛性发作伴站立；4级，翻转侧位倒地，阵挛．强制性发作；5级，翻转背部倒地，泛发性阵挛．强制性发作。连续3次获得Ⅳ级或Ⅳ级以上的运动性惊厥的大鼠为3完全点燃。待癫痫组大鼠点燃成功后，将雌性SD大鼠与雄性SD大鼠合笼。发现阴栓的那天记为孕0天。戊四氮组，连中文摘要续15天给予受精后的雌鼠腹膜内注射35mg／kg的戊四氮。盐水组，给予受精后的雌鼠腹膜内注射相应量的生理盐水。正常对照组孕鼠不给于任何处理。在妊娠15．5天，所有孕鼠给予10％的水合氯醛麻醉后

5、，剖腹取出胚胎脑组织。一部分胚胎脑通过WesternBlot测定糖原合成酶激酶．3p(GSK．3p)和磷酸化的糖原合成酶激酶．3p(P．GSK．3p)蛋白的表达水平。其余胚胎脑通过免疫组织化学测定磷酸化的糖原合成酶激酶．3p(P．GSK．3p)蛋白的表达水平及分布。结果：1行为学观察发戊四氮(PTZ)组大鼠于腹腔注射PTZ6．8天开始出现点头、洗脸等动作，症状逐渐加重，相继出现肌阵挛性发作但未站立；肌阵挛性发作伴站立；翻转侧位倒地，阵挛．强制性发作；翻转背部倒地，泛发性阵挛．强制性发作。妊娠期孕鼠给予35mg／kg的戊四氮可以诱导癫痫发作

6、。盐水组和正常对照组大鼠无癫痫作。2Westernblot结果戊四氮(PTZ)组胚胎脑组织磷酸化的糖原合成酶激酶．3p(P．GSK．3p)蛋白表达水平(1．069+0．411)较NS组(0．602+0．293)明显升高(尸O．05)。胚胎脑组织中糖原合成酶激酶．313(GSK．38)蛋白表达在NC组(1．142+0．339)、NS组(1．1

7、00士0．309)、PTZ组(1．287+0．345)之间无统计学差异(尸>0．05)。3免疫组化结果磷酸化的糖原合成酶激酶．313(p。GSK．313)在胚胎脑组织中的阳性细胞显示为棕褐色，主要在细胞的胞浆内表达，主要分布在皮层区。戊四氮(PTZ)组磷酸化的糖原合成酶激酶．313(P．GSK．38)蛋白在皮层区表达的阳性细胞数(47．583+3．680)较盐水(NS)组(27．333士2．20)明显升高(尸

8、80)较正常对照组(NC)组(29．083土3．942)明显升高(尸