槲皮素对白血病表观遗传修饰的机制研究

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1、武汉科技大学硕士学位论文槲皮素对白血病表观遗传修饰的机制研究姓名：杨旭申请学位级别：硕士专业：流行病与卫生统计学指导教师：王晓南20120525武汉科技大学硕士学位论文第1页摘要目的白血病是起源于造血系统的恶性肿瘤，流行病学调查表明白血病的发病率在5-6／10万，位于恶性肿瘤第六位，每年新增患者4—5万人。其发生机制与发展过程已经证实与多种遗传学因素相关，目前仍属一种难治性疾病。相关研究表明表观遗传修饰的失衡与白血病的发生具有密切关系。本实验主要研究槲皮素(Quercetin，QrN)对白血病NB4

2、细胞增殖、周期阻滞、凋亡及组蛋白H3、H4乙酰化、组蛋白H3K9、H3K27甲基化水平以及相应组蛋白去乙酰化酶、组蛋白甲基化酶的影响，进而探讨槲皮素的抗肿瘤机制。方法采用CCK．8检测槲皮素作用后NB4细胞的增殖活性，并与外周血单个核细胞作比较，PI单染法流式细胞术检测细胞周期，AnnexinV／PI双染法流式细胞术、Hoechst33258检测细胞凋亡，分光光度法检测caspase．3和caspase一9活性，Westernblot免疫印迹技术检测组蛋白H3、H4乙酰化，组蛋白H3K9、H3K27

3、甲基化水平以及HDAC8、SUV39H1、EZH2蛋白的表达，RT-PCR和Real．timeRT-PCR技术分别检测HDAC8和SUV39H1、EZH2的基因水平，免疫荧光共聚焦观察HDAC8、SUV39H1、EZH2的亚细胞定位和表达。结果槲皮素能明显抑制NB4细胞的增殖，其抑制作用呈时间、剂量依赖性，能引起NB4细胞的G0／G1细胞周期阻滞，诱导NB4细胞capsase依赖性凋亡，能明显升高组蛋白H3和H4的乙酰化水平，降低组蛋白H3K9me3和H3K27me3的甲基化水平，经槲皮素干预后，N

4、B4细胞HDAC8、SUV39H1、EZH2蛋白和mRNA水平均明显下降。结论槲皮素能够明显抑制NB4的增殖，引起G0／G1细胞周期阻滞，并能诱导凋亡；通过降低NB4细胞HDACS的表达从而提高组蛋白H3和H4的乙酰化水平；通过抑制NB4细胞SUV39H1、EZH2来降低组蛋白H3K9me3和H3K27me3的甲基化水平，这可能是槲皮素抗白血病作用的机制之一。关键词：槲皮素；组蛋白乙酰化；组蛋白甲基化；NB4；HDACS；SUV39H1：EZH2第1I页武汉科技大学硕士学位论文Abstractobj

5、ective：Leukemiaisamalignantdiseaseoriginatedfromhematopoieticsystem，theepidemiologicalinvestigationshowedthattheincidenceofleukemiain5-6／10000，andlocatedinthesixthplaceinthemalignanttumorsandnewpatientseachyear4-5millionpeople．Theleukeogenesisanddevelo

6、pmenthavebeenconfirmedwithmultiplecytogeneticsabnormalities．Presently，leukemiaisstilldifficulttotreat．Alargenumberofresearchesdocumentedthatepigeneticmodificationiscloselyrelatedtoleukeogenesis．Numerousstudiesshowthatthereisanintensiverelationshipbetwe

7、enthedisequilibriumofepligeticsandtheoeeuranceofleukemia．Hereweinvestigatedtheeffectsofquercetinoncellproliferation，cellcyclearrest，apoptosis，histoneH3andH4acetylation，histoneH3K9andH3K27trimethylation，andexprssionofthecorrespondinghistonedeacetylasean

8、dhistonemethyltransferassinvitro，tringtoexploretheanti-leukemiamechanism．Methods：TheeffectofquercetinonthegrowthofNB4cellwasstudiedbyCCK一8assayandcomparedwithPBMC．EfrectsofquercetinonthecellcycledistributionofNB4cellswerestudiedbypropid