猪骨骼肌中印记基因的分析

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1、山东农业大学硕士学位论文猪骨骼肌中印记基因的分析姓名：王猛申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：姜运良20120614山东农业大学硕上学位论文．：‘．中文摘要基因组印记是哺乳动物中常见的一种表观遗传修饰。其具体表现是来自双亲的等位基因或染色体在发育过程中经历专一化Bn-r修饰，导致后代细胞中只有来自一方的等位基因获得表达。研究表明，印记基因在胎盘发育、胎儿生长、遗传疾病以及癌症发生过程中起非常重要的作用。目前，基因组印记的研究工作主要集中在人和小鼠中。随着研究的不断深入，印记基因在猪中的研究逐渐增多起来，但仍有相当大的挖掘空间。因此，在猪中鉴定

2、一批新的印记基因对于分析基因组印记的物种间保守性、印记基因的功能以及家畜改良和育种等都具有重要的指导意义。本研究以莱芜猪．长白猪正反交为模型，分析亲代及其Fl代个体SNP以进行ePiE鉴定。通过RT．PCR，RFLP分析和PCR产物直接测序检测“表达的SNP”——cSNP，鉴定候选印记基因在初生猪骨骼肌中的印记状态，以期探讨基因组印记在猪与其他物种中的保守性及与骨骼肌发生相关的印记特征，进而从表观遗传的角度来研究骨骼肌发生的相关机理。主要结果如下：(1)克隆了猪SNRP膳因eDNA序列，共得到1304bp，其中包括完整的CDS区共723bp，编码240个氨基

3、酸；克隆了猪UBE3A基因eDNA序列，共得至U2907bp，其中包括完整的CDS区共2628bp，编码875个氨基酸。将猪的各候选基因的氨基酸序列进行物种间保守性分析及进行系统进化树的构建，结果表明NECD、MKRN3、SNRPN、UBE3A和OSBPL5基因在哺乳动物间均比较保守。各物种之间相对来说，以猪和牛的同源性最高，而与灵长类次之，与鸟类、爬行类、鱼类等同源性较差。(2)cSNP的发现，命名、位置及突变如下：鼢倪黝瑾因g．402T>C；NECD基因g．263C>G；UBE3A基因g．340A>G；MKR．N3基因吕293G>C、g．361A>G、g

4、．678C>T、吕1376T>C和g．1407A>T；OSBPL5基Ng．1873G>A。初生小猪骨骼肌中的印记鉴定发现田峨尸Ⅳ和砸CD基因是母系印记、父系表达的基因；OSBPL5基因、UBE3A基因和MKRN3基因认为是非印记的基因。同时对OSBPL5进行AEI的验证发现，该基因母系表·达约是父系表达的3倍，与父系印记趋势相同。MKRN3基因被发现为总是莱芜猪来源的等位基因获得表达。●(3)MKRN3基因上游存在一个CpG岛，OSBPL5基因远端启动子也存在一个CpG岛。甲基化分析表明，这两个区域都趋于DNA的高甲基化，这可能与基因的低表达量存在一定的联系

5、，MKRN3基因5'-CpG岛甲基化对其基因表达有一定的影响，但不起绝对作用。猪骨骼肌中印记基因的分析．(4)分析OSBPL5躯]g．1873G>A突变在各个猪群体中的分布。发现在在杜洛克猪和大蒲莲猪中，GG型为优势基因型，而在莱芜猪中AG杂合为优势基因型。除莱芜猪群体外均处于哈代温伯格平衡。性状关联分析表明g．1873与产仔数、管围相关极显著(P

6、而MKRN3存在莱芜猪特异的基因表达形式。研究还表明OSBPL5基因的吕l873G>A突变与猪产仔数和管围有关。关键字：猪；印记基因；单核苷酸多态；等位基因不平衡表达；甲基化2山东农业大学硕士学位论文AnalysisofImprintedGenesinPorcineSkeletalMuscleAbstractGenomicimprintingisoneofthemostCOITLrnonepigeneticmodificationinmammals．Thatallelesfromparentshasaspecificitymodificationduring

7、development，andasaresultonlyonealleleisexpressed．Studieshaveshownthatgenomicimprintingplaysaveryimportantroleintheplacentaldevelopment，fetalgrowth，humangeneticdiseaseandcancer．Untilnow，moststudiesaboutgenomieimprintinghavebeenfocusedonhumanandmice，inpig，althoughmoreimprintedgenesar

8、eidentifiedbutstillrelativ