双氯芬酸钠对大鼠骨髓间充质干细胞增殖凋亡及成骨分化影响

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文目录lIIIJlIIIIILIIIIIlllLIIIIIllllIlUlIIIIIIllIIIIY2692151英文缩写说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要(关键词)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要(关键词)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··4前言···⋯··⋯··⋯·⋯······⋯·····⋯········⋯·⋯·⋯·一““·⋯“⋯⋯”·6日IJ舌““””⋯“⋯”一”“”⋯““”一”“““⋯”一“””““”⋯“⋯⋯”‘b材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯

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3、士学位论文英文简写说明简写英文全称中文全称NSAIDsNonsteroidalAntiinflammatoryDrugs非甾体抗炎药BMSCsBonemarrowmesenchymalstemcells骨髓间充质干细胞PGProstaglandinAPApoptosisFCMFlowcytomytryOCNOsteocalcinBMP-2Bonemorphogeneticprotein-2PIPropidiumiodideCOXCyclooxygenase前列腺素凋亡流式细胞术骨钙素骨形成蛋白2碘化丙啶环氧化酶ALPAlkalinephosphatase碱性磷酸酶NAPA

4、lkalinephosphatasestaining碱性磷酸酶染色万方数据温州医科大学硕士学位论文双氯芬酸钠对大鼠骨髓间充质千细胞增殖凋亡及成骨分化的影响中文摘要目的通过不同浓度的双氯芬酸钠干预全骨髓贴壁法培养的骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells。BMSCs)，观察双氯芬酸钠对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法应用全骨髓贴壁法进行原代培养，并通过表面抗原和成骨、成脂分化能力鉴定其为BMSCs，并计算其细胞倍增时间。采用不同浓度的双氯芬酸钠(6．4mg／L，3．2mg_／L，1．6mg／L，0．8m

5、g／L，0．4mg／L)干预BMSCs，通过MTS法检测双氯芬酸钠对BMSCs增殖的影响；通过AnnexinV-FITC法检测双氯芬酸钠对BMSCs凋亡的影响。不同浓度的双氯芬酸钠干预BMSCs，AnnexinV／PI双染法检测双氯芬酸钠对BMSCs细胞周期的影响。不同浓度的双氯芬酸钠进行干预诱导BMSCs成骨分化，21天后茜素红染色，观察钙结节形成情况。成骨诱导培养BMCSs，6．4mg／L的双氯芬酸钠干预，分别在第3天、7天以及14天进行ALP染色，并提取总RNA采用RT-PCR法检测成骨相关基因(ALP、OCN和13．actin)的表达情况。统计分析：应用SPSS2

6、0．0软件进行分析，各试验组资料统计量均以均数±标准差(Z±s)表示，多样本均值之间比较采用方差分析，两两比较应Dunnett—t检验，P<0．05表示有统计学意义。结果细胞倍增时间约为28小时。双氯芬酸钠药物干预细胞相对增值率较对照组明显下降，细胞的生长抑制率明显升高，各组细胞数量减少，形态改变(胞浆集中，核较明显，失去典型的梭型，部分细胞发生凋亡，核固缩)，上述改变与药物的浓度呈相关性。PI染色流式检测结果显示绝大部分的细胞停滞在G。／G。期，随着药物浓度的升高，进入分裂期的细胞也随之明显减少。茜素红染色发现，与对照组相比，随着双氯芬酸钠浓度的上升，钙结节的数量呈减少

7、的趋势，6．4mg／g组茜素红染色几乎没有钙结节形成。ALP染色结果显示与对照组相比实验组的ALP的表达明显减少。PCR结果显示：在成骨分化诱导的第3天实验组以及对照组ALPmRNA、OCNmRNA表达均较低：在诱导成骨分化第7天，实验组与对照组ALPmRNA表达均明显升高，实验组ALPmRNA表达升高趋势较弱，OCNmRNA表达下降明显，对照组OCNmRNA表达与第3天相比基本无差异；成骨分化第14天，对照组ALPmRNA表达量出现明显下降，实验组ALPmRNA表达与第7天相比无明显差异，实验组OCNmRNA表达基本无变化。