沉默atf5对卵巢癌细胞skov-3裸鼠成瘤的研究

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1、摘要目的：分析慢病毒转染沉默人转录激活因子5(Activatingtranscriptionfactor5，ATF5)后，对卵巢癌SKOV一3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响，通过体外和体内的实验研究来探讨卵巢癌的基因治疗，探索沉默ATF5的表达后，能否开辟卵巢癌治疗的新方法。方法：l、慢病毒携带小于扰RNA，分别将构建好的携带RNA干扰质粒(沉默ATF5)和空载体的慢病毒感染生长良好的卵巢癌SKOV-3细胞和卵巢癌SKOV一3细胞进行对照，对比观察细胞的生长状态。2、MTT法检测细胞的增殖生长。3、罗氏凋

2、亡检测试剂盒检测细胞凋亡。4、采用裸鼠皮下接种细胞的方法，于裸鼠皮下接种成瘤，观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况，进一步计算成瘤率。5、RT-PCR检测移植瘤ATF5mRNA的表达情况。6、Western—Blot检测移植瘤ATF5蛋白的表达情况。7、HE染色观察瘤组织组织学变化。结果：1、在体外培养条件下，SKOV一3的生物学形态没有明显差异。在相同培养时间内细胞的增殖无统计学意义，但RNA干扰的实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。2、皮下接种成瘤后，三组裸鼠的成瘤率没有明显区别，但RNA干扰组肿瘤成

3、瘤时间晚，生长缓慢。3、移植瘤组织RT—PCR显示RNA干扰组mRNA表达量与其他对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)；4、瘤组织Western—Blot显示RNA干扰组ATF5蛋白表达差异有统计学意义(P<0．05)；5、HE染色法观察RNA干扰组分裂相明显减少，凋亡现象明显。结论：沉默ATF5的表达后人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长缓慢，这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。硕士研究生谷雪(妇科)指导教师陈爱平教授关键词：ATF5；上皮性卵巢癌；裸鼠；移植瘤；基因治疗IIIIIILIIIIlUlllklMI

4、IIIIIIIIllllIY2589539Abstractobjective：AnalysisaftersilencingATF5，theeffectonovariancancercellsproliferationandapoptosisinvitroandinvivoinSKOV一3cells，togainapreliminarydiscussionabouttheapplicationvalueofATF5silenceinhuman．Methods：1、AlentiviralvectorwithRNA

5、interference(RNAi)ofATF5geneinfectedSKOV一3cells．comparedwithanemptyvectortransfe：ctionSKOV-3cellsandnormalSKOV一3cells．inordertoobservethegrowthofthethreegroupsofcellsproliferation．2、MTTmethodiSusedtodetectculturecellproliferationinvitrogrowth．3、WeusedSituCe

6、llDeathDetectionKit(TImEL)todetectcellapoptosis．4、Plant3kindsofcellsinnudemicerespectively，observeeachgroupsurvivalCondition、tumorgrowthinnudemice，andcalculatetumorrate．5、RT—PCRiSusedtodetectetheexpressionofATF5mRNAintumortissue．6、WestemBlotiSusedtodetectet

7、heexpressionofATF5proteinintumortissue．7、HEstainingisusedtoobservetumorbiologicalchangeintheformoforganization．Results：l、Therewasnosignificantdifferenceinvitroculturecellbiologyformduringthreegroups，atthesametimethecellproliferationhasnostatisticalsignifica

8、nce．ThegroupwithATF5-silencetransfectionhasahigherapoptosisthantheblankcontrolgroupandthenonspecifictransfectiongroup．2、Afterinoculation，therewasnosignificantdifferenceinthethreegroupsofnudemousetumorr