放线菌769对水稻抗稻瘟病的诱导抗性研究

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1、吉林农业大学硕士学位论文放线菌769对水稻抗稻瘟病的诱导抗性研究姓名：隋丽申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：陈光;李启云20080601放线菌769对水稻抗稻瘟病的诱导抗性研究摘要本研究所使用的供试菌种为放线菌769(Streptomycesahygroscopicusgongzhulingensis91．vat．Ruan．etZhang．1974)，该菌种于1974年从吉林省农业科学院温室土壤中分离出来，是一种对多种病原菌有抑制作用的拮抗链霉菌。本研究探讨了769菌株在防治水稻稻瘟病方面的应用情况，对该菌种的发酵培养基和发酵条件进行了摇瓶发酵条件优化，确定了最佳发酵条件下769菌株

2、发酵液的抑菌谱，测定了最佳发酵条件下发酵液的稳定性，并用不同浓度的发酵液处理水稻幼苗，在不同的时间对水稻秧苗中三种主要防御酶(过氧化氢酶，CAT；过氧化物酶，POD；苯丙氨酸解氨酶，PAL)活性变化规律进行检测。本研究拓展了769菌种的应用空间，为今后该拮抗放线菌的开发和应用提供一定理论依据和技术支持。本文对影响菌株769抑菌活性的发酵培养基组分进行了优化，通过对放线菌发酵培养常用的六种发酵培养基进行了筛选，确定了基础培养基，在此基础上对碳氮源和无机盐进行了优化，通过正交试验确定了菌株769的最优发酵培养基配方为：黄豆豆粉2．0％，玉米粉1．50％，蔗糖1．O％，牛肉膏0．60％，碳酸钙O．3

3、0％，硫酸铵0．50％，氯化钠0．30％，硫酸镁0．10％，磷酸二氢钾O．02％，硫酸亚铁0．01％。通过对最佳发酵培养基初始pH值、接种量、摇瓶装液量、摇床转速等发酵条件进行正交试验设计，确定摇瓶最佳发酵条件组合为：种子液菌龄28h，接种量4％，发酵时间72h，培养基初始pH6．72，培养基装量70ml／250ml三角瓶，发酵温度28℃，摇床转速180rmin～。最佳发酵条件的抑菌率达到87．75％，比初筛结果高出20％。通过分析菌株769发酵液抑菌谱，发现发酵液对抑制植物病原菌具有广谱性，对稻瘟病菌、番茄炭疽、构巢曲霉、番茄叶霉、番茄灰霉、玉米穗腐、小麦赤霉病原菌等有不同的抑制作用。对76

4、9菌株发酵液的酸碱稳定性研究表明，发酵液在酸碱环境中稳定性好，只有在强酸和强碱环境中活性有所下降；热稳定性研究表明，在100℃的环境中随着时间的延长抑菌活性不断下降，说明它的热稳定性在高温下不是很好，但在其它温度下其活性基本没有改变。通过测定发酵液对水稻幼苗主要防御酶活性结果显示，原液、稀释10倍、稀释20倍的发酵液处理水稻秧苗，以发酵液原液的作用效果最为显著，处理后水稻体内各种防御酶比对照均有明显变化，使水稻获得系统抗病性。769菌株发酵液处理水稻叶片可抑制过氧化氢酶(CAT)的活性，提高过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。表明发酵液可诱导和增强POD、PAL的表达和过氧化氢

5、含量的提高，从而增强植物的防御反应。关键词：放线菌769，发酵条件，稻瘟病，防御酶IIInducedresistancestudyofActinomycetes769againstMagnaporthegriseaAbstractStrain769(Streptomycesahygroscop&usgongzhulingensisrLvar．Ruan．etZhang．1974)，whichwasisolatedfromasoilsamplein1974，WasaneffectiveantagonisticStreptomycessp．ondifferentplantpathogens．Wedi

6、scussedtheapplicationofswain769inriceblastcontr01．Fermentationmediumandfermentationconditionswereoptimizedinflask．Theinhibitionspectrumofstrain769andthestabilityoffermentationproductionwerestudied．Thedefenseenzymes(Catalase，CAT；Peroxidase，POD；Phenylalanineammonialyase，PAL)activityWasanalyzedofthetre

7、atedriceleaveswithdifferentconcentrationof769fermentationproductionanddifferentgrowthperiods．Thestudynotonlydevelopsthenewareasofstrain769butalsoprovidescertaintheorybasisandthetechnicalsupportforthis