改良血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模型

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1、结论第一章材料与方法1．1实验动物及分组健康成年雄性Wistar大鼠68只(省动物中心提供，许可证号：slxk20080002)，体质量250'---3009。随机分为三组：假手术组(S组)8只，传统模型组(T组)及改良模型组(I组)各30只。1．2实验仪器设备(1)30W自制电烙铁(将普通30W电烙铁前头磨尖)(2)江湾I型立体定向器(3)手术大包(内有组织剪，止血钳，刀柄刀片，丝线，大小圆针等)(4)双极电凝器(5)显微镜(6)TBS磨钻1．3模型制作过程改良组：大鼠用质量分数10％的水合氯醛进行

2、腹腔麻醉(3mL／kg"1)[4】，五分钟后将其俯卧位固定于操作台上。颈后皮肤消毒，正中方向向上切开约2cm；后沿切口钝性逐层向两侧分离组织直至暴露第一颈椎；再顺着第一颈椎斜向内上方向寻找翼小孔并使其完全显露；将自制烧灼器分别插入双侧翼孔，各反复烧灼5-6次，每次2。3s，造成双侧翼孔内穿行的椎动脉永久闭塞【51，逐层消毒缝合组织。再将大鼠仰卧位四肢固定，颈前组织消毒，正中方向切开组织约2cm显露气管，后沿气管两侧逐层向外分离颈动脉鞘，游离双侧颈总动脉(注意与其伴行的迷走神经，伤及易’结论造成心跳骤停

3、)，游离双侧颈总动脉，后置线系活结；消毒逐层缝合组织。手术结束后将其放入笼内，待其清醒后自由饮食。模型制备24小时后大鼠仰卧位四肢固定于操作台上，清醒状态下消毒皮肤拆开颈前区缝合线，提取线结，同时夹闭双侧颈总动脉造成缺血，5min后松开动脉夹造成复灌，消毒缝合组织，让其自由饮食。传统组：大鼠充分显露翼孔后，磨钻仔细地沿翼小孔表面逐层打磨周围骨面直至完全显露穿行下面的椎动脉，后连接双极电凝器，在显微镜直视下30W电凝一次性烧灼双侧椎动脉，造成椎动脉离断，其余步骤同改良组。假手术组：大鼠暴露第一颈椎后不处

4、理动脉，大鼠游离双侧颈总动脉后不系线，其余同改良组。1．4实验条件：整个实验过程中保持室内温度适宜以及大鼠模型制备和缺血再灌注都在同一时间。1．5观察指标生理指征：双侧颈总动脉夹闭后5min内出现①意识模糊②眼球由红变白，双侧瞳孔对光反射消失③翻正反射消失④呼吸加快，出现深大呼吸。实验过程中凡达不到以上标准或大鼠夹闭动脉后立刻出现抽搐死亡均视为失败。行为学检测：模型建立成功7天后我们进行Morris水迷宫来检测大鼠空间辨别能力测试。Morris水迷宫是一个高lm的黑色圆形水池(内有人工站台一个、水池上

5、方聚焦摄像头及与摄像头相连接的自动电脑分析软结论件系统)。测试前先将水注入池内，水深30cm(臣1]水面比站台高约1cm，使大鼠看不见站台)，水温约为(244-1)℃。三组大鼠各取8只进行此项测试。整个测试过程分为两部分：第1阶段为大鼠空间辨别能力学习阶段：第一天第一次训练先将大鼠平放于平台上适应1min，然后取平台对侧象限某一位置将大鼠放入水中让其自由游泳寻找平台。入水时刻开始记时，120s内未找到平台者，实验者将其引至平台停留10s；120s内找到平台同样让其在平台上停留10s。第二天开始，大鼠固

6、定位置面向池壁放入水中，让其进行自由游泳寻找平台。步骤方法同第一天，超过120s按120s计算。每天上下午固定时间各训练一次，将两次寻台时间的平均值作为当日空间辨别能力学习的成绩，此过程共持续4d。第二阶段为空间辨别能力检测阶段，即在第六天上午同一时间撤掉平台，同样位置放入大鼠，记录大鼠第一次站平台的时间即潜伏期，超过120s按120s计算。liE染色：各组于再灌后相应时间取大鼠麻醉后，4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液透心灌注，断头后取脑于视交叉后冠状面1,---4111113之间脑组织，后固定2h，洗涤4h

7、，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。在海马平面冠状切片，切片厚5岬，室温保存。1．5统计学分析资料分析采用SPSS11．0统计分析软件，计量资料用2士S表示，均数间比较采用单因素方差分析和f检验，P<0．05为有显著差异。第二章实验结果2．1制模成功率的比较在充分预实验的基础上，I组大鼠造模成功25只，成功率约83％(25／30)；T组大鼠造模成功20只，成功率约67％(20／30)2．2制模时间的比较我们从翼孔完全暴露开始计时，到烧灼椎动脉结束为止；I组平均烧灼时间约为31s，T组平均烧灼时间约为

8、612s，两组具有显著统计性差异(P<0．05)。2．3制模费用的比较T组仪器显微镜75万，TBS磨钻15万，双极电凝器lO万；I组电烙铁系市场普通电烙铁，约15元。2．4Morris水迷宫测试结果1．Morris水迷宫测试与S组相比，手术组大鼠空间学习时间明显延长，而潜伏期也明显长于S组，T组与I组之间无显著性差异。见表1各组大鼠Morris水迷宫测试结果的比较(j迅◇※注：①P<0．01：与前1d时间点相比②P