胃癌腹膜转移相关蛋白myosin--9促进胃癌的侵袭和转移

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1、南方医科大学2011级博士学位论文胃癌腹膜转移相关蛋白Myosin一9促进胃癌的侵袭和转移Peritonelmetastasisassociatedprotein】V【yosin一9inducesmigrationandinVasionofgastriccancer课题来源：自选课题学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员张磊李国新教授外科学学术型博士研究生第一临床医学院兰平教授_一l。'7、1，～雷建教授张玉新教授黄宗海教授黄祥成教授2014年5月21日广州博士学位论文胃癌腹膜转移相关蛋白M

2、yosin．9促进胃癌的侵袭和转移博士研究生：张磊指导教师：李国新摘要胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一，近年来随着早期诊断、胃癌根治术和新辅助放化疗等的发展，其预后有所改善，但其死亡率仍居恶性肿瘤死亡率的前列。影响胃癌预后的因素有很多，其中腹膜转移在胃癌的复发和转移中十分常见。胃癌腹膜转移常合并有顽固性腹水和粘连性肠梗阻等症状，促使患者短期内死亡。因此，如何有效的预测与控制腹膜转移是目前提高进展期胃癌疗效的关键问题之一。目前临床上用于胃癌腹膜转移早期诊断的方法主要包括腹腔液细胞学检查和分子标志物检查等。腹腔液细胞学检查是目前胃癌腹膜亚

3、临床转移早期预测的最常用方法和金标准，但是其敏感性较低，因为并非所有浸透浆膜的进展期胃癌均能检测出腹膜脱落癌细胞。目前用于检测的分子标志物指标包括CEA、CAl25、E．钙粘素、p1整合素、MMPs、VEGF等，但是目前国内外基础研究尚未找到一种公认的早期预测进展期胃癌腹膜转移的分子标志物。因此如何找到有效的胃癌腹膜转移早期预测的分子标志物，对于提高胃癌腹膜转移的预防和治疗，改善患者的预后具有重要现实意义。近年来开展的蛋白质组学技术为揭示肿瘤转移机制带来了新的希望。蛋白质组学(proteo“cs)及其相关技术是近年来新兴的分子生物

4、学分支，是以基因编码的所有蛋白质组为研究对象，了解蛋白质之间的相互作用与联系，从而揭示蛋白质功能以及基因表达调控机制的一个新的研究领域，其核心技术摘要是以双相凝胶电泳(Two-dimension2Llp01yac巧一l觚lidegelelec仃ophoresis，2·DE)为主的蛋白质分离技术和以质谱(maSsspec．仃ome仃y，MS)、生物信息学(Bioinfonnatics)为主的蛋白质鉴定技术。目前已经有许多新的差异蛋白质组分析方法用于实践，其中荧光差异凝胶电泳(di毹rencegelelec仃ophoresis，DIG

5、E)技术由于继承了二维凝胶电泳(似o．dimensionalelec仃ophoresis，2-DE)的高分辨率，同时又具备高重现性、高灵敏度、高通量和高动态范围等优势，使得DIGE日益受到关注，成为最受欢迎的定量蛋白质组学研究手段之一。DIGE技术通过对用不同的荧光染料对不同的蛋白样品进行标记，在同一块双向凝胶中可同时分离多种蛋白样品，并且每块胶上均引入了内标，内标可以进一步增加可信度，确保结果能反映出真实的生物学差异，避免了系统误差对实验结果的影响。目前，蛋白质组学技术已在多种肿瘤中用于筛选和鉴定同早期诊断、预后以及化疗敏感性等

6、相关的肿瘤标记物。综上所述，本课题主要关注的是寻找同胃癌腹膜转移相关的蛋白质，并选择其中一个差异蛋白进行进一步的功能验证和机制的初步研究。实验的第一部分使用2D．DIGE分离结合MALDITOF／TOF质谱对胃癌组织和相应腹膜转移组织的差异表达蛋白质进行筛选鉴定，共鉴定出27种蛋白质。其中在胃癌腹膜转移组织中表达上调的有23个蛋白质，表达下调的有4个蛋白质，这为今后研究奠定了基础。然后利用生物信息学分析发现在上述这些差异蛋白中，Myosin．9蛋白可能在肌动蛋白细胞骨架重组、肌动蛋白纤维运动、血管生成、细胞．细胞间黏附以及蛋白转运

7、等生物过程中发挥重要作用，根据以上结果我们推测Myosin．9可能参与了胃癌的侵袭和转移过程。因此第二和第三部分我们对Myosin．9进行了更深入的研究，结果发现抑制Myosin．9的表达后，细胞的迁移和侵袭能力减弱，而粘附能力增加，裸鼠腹腔播散肿瘤结节形成数目也明显减少。然后进一步检测上皮间质转化(ep油elial．mesenchymal仃a11sition，EMT)相关标志物发现，抑制Myosin．9的表达后，胃癌细胞EMT过程受到抑制。基于以上结果，我们认为Myosin．9能够促进胃癌细胞的侵袭和转移能力，此过程可能是II博

8、士学位论文通过促进胃癌细胞EMT而实现的。虽然本实验证实Myosin．9影响了胃癌细胞的侵袭转移能力，但是恶性肿瘤的发生和发展是多种基因和蛋白质相互作用的结果，任何单个基因或蛋白质都很难全面说明肿瘤复杂的生物学行为，且Myosill．9在胃癌中更深