白桦bpflc基因的过量表达及rnai遗传转化研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14772DissertationfortheDegreeofMasterOverexpressionandRNAiofBpFLCinBetulaPlatyphyllaCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：FengjuanCaoDeanXiaGuanzhengQuMasterFores

2、tTreeGeneticsandBreedingJune2014NortheastForestry万方数据摘要凡C基因，是开花植物中的一个调节植物开花进程的关键基因，它是一个抑制开花基因，特别是在春化过程中起到关键作用。白桦中存在的FLC基因，即BpFLC基因。本文研究了白桦的FLC基因对白桦的生殖生长和营养生长的一些影响以及构建BpFLC-RNAi干扰表达载体转入白桦后，再对转入后的白桦的FLC表达量进行测定以及后续的研究。通过荧光定量PCR的方法，检测了BpFLC基因在白桦不同生长时期的表达量，检测结果是：BpFLC基因在白桦的不同生

3、长时期中均有表达，但在5年生及多年生白桦苗中的表达量最低。检测BpFLC基因在5年生白桦的一年里不同时间的表达量，发现：BpFLC基因在一年中均有表达，但5月和6月的表达量最低。此外，对BpFLC基因过表达的白桦苗和野生型对照分别测量了移栽后4个月、6个月和8个月的株高，分析发现：6号、8号和lO号株系与野生型白桦株高差异显著，且随着白桦生长，6号和8号株高差异变得更加显著。对BpFLC基因过表达的白桦苗和野生型对照分别测量了移土后9个月的地径，分析发现4号和9号株系与野生型差别显著，10号极显著。说明BpFLC基因的过量表达对白桦的株高

4、及地径有一定的影响。对休眠后的BpFLC基因过表达白桦与野生型白桦进行生长状态进行统计，发现：BpFLC基因过表达白桦与野生型白桦的整体生长状态差异不大，推测BpFLC基因的过量表达对白桦休眠后的总体生长状态基本没有影响，但4、8、10和11号株系经历休眠后，与野生型相比，较容易从基部长出新枝，且4和11号长出新枝数量较多。为了后期实验造林，本文中对BpFLC基因过表达的白桦组培苗进行扩繁培养，从最初的组培苗切茎段长到愈伤、再从愈伤长成丛生苗、从丛生苗到生根苗，最后移到花盆土中，需要5到6个月的时间。目前已经扩繁550到600株，用于后期

5、实验林的建设及研究。构建了BpFLC-RNAi干扰表达载体，利用液氮冻融法转入到EHAl05农杆菌巾，得到转化子，并通过农杆菌介导法对白桦进行遗传转化，得到了5个株系。通过荧光定量PCR的方法，测得转基因白桦的BpFLC表达量均有所降低。说明BpFLC—RNAi调控了BpFLC基因的表达。关键词RNAi；白桦；干扰载体；遗传转化万方数据AbstractAbstractFLCisacriticalgeneofregulatingfloweringprocessinplants，whichisarepressorofflowering，esp

6、eciallyinvernalizationpathway。TheFLCinBetulaplatyphylla，namedasBpFLC，wasstudied．WeanalyzedtheinfluenceofBpFLConvegetativegrowthandreproductivegrowthofbirch．RNAiofBpFLCwasperformedinbirchusingmethodofgenetictransformation．FinallyweanalyzedtheexpressionofBpFLCbyQ-PCR．ByQ．PC

7、R，WemeasuredtheexpressionprofileofBpFLCofdifferentgrowthphaseinbirch．wefoundthattheexpressionofBpFLCin5-year-oldandoldermorebirchwas10w．WealsomeasuredtheexpressionofBpFLCinbirchof5yearsoldindifferentmonth，andfoundthattheexpressionofBpFLCinMayandJuleislowest．Moreover,wemea

8、suretheHeightofwild．typebirchandBpFLC-transgenicbirchof4，6and8months，respectively．Wefindthatther