降低小鼠脑背景荧光的方法研究

《降低小鼠脑背景荧光的方法研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号学号M201171596学校代码10487密级硕士学位论文降低小鼠脑背景荧光的方法研究学位申请人：：胡碧荷学科专业：生物医学工程指导教师：龚辉教授答辩日期：2014.2.12万方数据AThesisSubmittedInPartialFulfillmentoftheRequirementsForTheDegreeofMasterofScienceInEngineeringStudyonReducingBackgroundFluorescenceinMouseBrainCandidate:HuBiheMajor:Biom

2、edicalEngineeringSupervisor:Prof.GongHuiHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaFeb.12,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名

3、：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据华中科技大学硕士学位论文*摘要神经结构高分辨成像对当今神经科学的发展具有重要

4、意义。一个多世纪以来，神经细胞标记与光学显微成像技术相结合的方法被广泛用于大脑结构研究中。近年来，荧光蛋白标记技术实现了在小鼠全脑范围内标记特定神经细胞，全脑自动化三维光学显微成像方法也逐步发展起来。其中，结构光照明显微镜（StructuredIlluminationMicroscopy，SIM)）与荧光显微光学切片断层成像（fluorescenceMicro-OpticalSectioningTomograpy，fMOST）结合的SIM-fMOST是目前能在亚微米分辨率下快速获取荧光标记小鼠全脑数据集最有效的光学技术。然

5、而背景荧光极大地干扰了SIM-fMOST对脑组织内神经元纤维精细结构的分辨，限制了SIM-fMOST技术快速获取荧光数据的应用和发展。为此，本文提出了一种能显著降低鼠脑组织背景荧光的样本制备方法。基于吸收散射的原理，本文提出一种增加脑组织的光吸收系数来降低背景荧光的方法。采用0.5‰-3‰的苏丹黑B(SBB)/95%乙醇溶液处理鼠脑样本，能够对厚鼠脑组织甚至全脑进行快速均匀地染色，在保持大部分荧光蛋白强度的同时减少75%-100%的背景荧光。同时为满足SIM-fMOST需对样品进行塑性包埋的特点，本文进一步地将SBB染色方

6、法与GMA树脂包埋相结合，配制了具有光吸收性的GMA(AIBN)-SBB染色包埋液，实现了对荧光蛋白标记小鼠全脑的染色和包埋，样品制备总时间为7天。结合GMA-SBB塑性包埋和SIM-fMOST采集技术，在获得的thy1-GFP-M小鼠全脑数据集中，能够清晰地显示全脑各个部位的神经纤维等细节信息。关键词：小鼠全脑成像荧光蛋白塑性包埋背景荧光苏丹黑B*本课题得到国家自然科学基金（项目批准号：81127002）和国家自然科学基金创新研究群体科学基金（项目批准号：61121004）的资助I万方数据华中科技大学硕士学位论文*Abs

7、tractHigh-resolutionimagingofneuralanatomyisofgreatsignificancetocontemporaryneuroscience.Themethodcombiningneuronlabellingwithlightmicroscopehasbeenusedwidelyformorethanacentury.Inrecentyears,fluorescentproteinscanlabelspecificneuronsinwholemousebrain,andtheautom

8、atedlightmicroscopesforimagingwhole-brainthree-dimensionallyhavealsobeendeveloped.Thereinto,SIM-fMOSTwhichcombinesstructuredilluminationmicroscopy(SIM)a