小鼠脑定位注射.doc

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1、小鼠脑定位注射protocol实验器材和用具：剃头刀，伤口缝合剪，定位仪扳手，双氧水，酒精，碘酒，棉签，镊子，镊子剪，病毒，0.01MPBS,人造眼泪，抗生素，电热毯实验准备：PBS将针头针筒清洗两遍，Protocol：1.1%戊巴比妥钠(85.7mg/公斤)将小鼠麻醉;2.头顶部去毛，然后给小鼠眼睛抹上人工眼泪；3.将其头部固定于定位仪上，上颚牙齿挂到定位仪上，旋动头部螺旋使其刚好压住老鼠的鼻子，将两侧小棒插入到小鼠双耳中，约7格,使其头部稳定；4.消毒，碘酒擦拭，然后用酒精擦，共三遍；5.用手术刀从头部中央划开一个

2、小口，用镊子剪将伤口剪大；6.用伤口夹将伤口处皮肤拉向两侧，3%的双氧水将筋膜去除，找到bregma，lambda两点，通过头部固定螺旋使bregma，lambda两点高度一致；7.定点：距bregma点3mm处为第一点，分别向两侧2.6mm用染料定两点，定位仪向前移1mm，距bregma点2mm处定第二点，分别向两侧1.6mm用染料定另外两点，如右图；8.电钻打孔；9.注射：先抽取4µL的PBS，然后抽0.5µL的空气，最后抽取4µL病毒，W为吸，I为注射，注射速度为500nl/min；10.将注射针固定于定位仪上，

3、小心将针头下降至头颅钻孔水平面，若从针尖算：前两个点为插入3mm，后两个点为3.5mm；若从斜面刚进入脑颅中算起：前两个点为2mm，后两个为2.5mm；11.病毒注射完后，要将其静止3分钟后，慢慢将针头退出,以便病毒很好的被吸收，四个孔均如此；12.注射完后，用两个PBS棉签将针头上的血迹清理干净，避免针头弯曲，用乙醇反复清洗针筒十次；13.用捏子将伤口两侧皮肤扯到一块，用缝合剪缝好，敷上抗生素，将小鼠放在热毯上，便于苏醒；14.将所用手术器械用酒精擦拭干净，柜台内收拾干净，处理好垃圾，UV照射三十分钟。