灰葡萄孢bc1g_08931基因的功能研究

《灰葡萄孢bc1g_08931基因的功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中农业大学硕士学位论文灰葡萄孢BC1G＿08931基因的功能研究姓名：熊云申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：程家森201206灰葡萄孢BCIG08931基因的功能研究摘要灰葡萄孢(Botrytiscinema)所引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害，灰葡萄孢菌的寄主范围非常广泛，可侵染多种经济作物和观赏植物，造成严重的经济损失。灰霉病的防治是农业生产上的难题之一，目前主要依赖化学农药。从分子水平上探究灰葡萄孢菌的致病和发育等机理可为灰霉病的防治奠定基础，本研究主要是利用基因沉默和超表达技术对BClG08931的基因功能进行了初

2、步研究，取得了如下研究结果：1、以本实验室核盘菌表达谱为基础筛选出核盘菌SSlG11468基因的同源基因BClG一08931，该开放阅读框含有829bp，序列全长741bp，编码246个氨基酸，含有2个外显子，1个内含子。其cDNA软件预测显示编码蛋白有信号肽并具有DUF3129和DUF3988两个的未知功能的保守结构域。RT-PCR结果表明该基因在菌丝的生长阶段表达量较高，后期菌丝出现白色纠结时表达量开始有所下降，至形成菌核时表达量最低，结果说明该基因可能参与了灰葡萄孢的菌核形成过程。2、分别构建了该基因的超表达载体和沉默载体，并通过农杆菌介

3、导转化出发菌株CanBC一3V得到了147个沉默转化子和89个超表达转化子，并通过PCR进行了验证。RT-PCR结果表明，与出发菌株CanBC一3V相比，大部分的沉默／超表达转化子中BClG08931基因的表达量均有所改变，选取表达量差异明显的3个沉默转化子和2超表达转化子，通过Real—timePCR定量分析进一步进行了表达验证。3、研究表明沉默或超表达BClG08931基因对灰葡萄孢的菌丝和孢子形态无明显影响，但沉默转化子在产酸能力、菌丝生长速度、致病力和生物学产量方面均有不同程度的下降，而超表达转化子在以上四个方面均有不同程度的升高，证实

4、了BClG08931基因与这些生物学表型的相关性。沉默转化子产菌核数目增多，菌核有所变小，而超表达转化子则表现为数目减少，体积增大，结果说明BClG一08931基因与菌核形成能力相关。4、在不同温度下和不同碳源培养基上的培养试验表明BClG08931基因对灰葡萄孢菌在不同碳源和温度条件下的生长无明显影响。华中农业大学2012届研究生学位论文本研究初步证实了灰葡萄孢BClG08931基因与其菌丝生长、产菌核能力和致病等相关。关键词：灰葡萄孢；BClG08931；菌丝生长；菌核形成；致病灰葡萄孢BCIG08931基因的功能研究ABSTRACTGra

5、ymoldcausedbyBotrytiscinereaisaworldwidedistributionplantdisease，andB．cinemahasaverywidehostrangeandcausesseriouseconomiclosses．Controlofgraymoldmainlydependsonfungicides．ExploringthemechanismofthepathogenicityordevelopmentofB．cinereaatthemolecularlevelCanlayabasisforthecont

6、rolofB．cinerea．ThegenefuntionoftheBClG一08931Wasanalyzedpreliminarilyusinggenesilencingandoverexpressiontechnologyinthisstudy，themainresultswerelistedasfollowing：1．BClG一08931WasthehomologousofSSlG一11468，whichWasscreenedfromthegeneexpressionprofileofSclerotiniasclerotiorum．The

7、OREofBClG一08931Was829bpinlength，containingtwoexonsandoneintron．ItseDNAsequenceWas741bp，encodeda246aaprotein．Thisproteinhadasignalpeptideandtwoconserveddomains，DUF3129andDUF3988，、析munknownfunction．RT-PCRresultsshowedthattheexpressionlevelofBClG一08931washighatthemycelialgrowth

8、stage，whileWaslowatthesclerotiaformationstage．2．Overexpressionandsilencingv