日本血吸虫多价dna疫苗的构建及免疫保护性研究

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1、吉林农业大学硕士学位论文日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及免疫保护性研究姓名：高胜岩申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：魏峰;刘全20080601日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及免疫保护性研究摘要日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病，目前仍以药物(吡喹酮)治疗为主。但是药物治疗不能阻断血吸虫病的传播与流行。因此加强血吸虫疫苗的研究是控制我国血吸虫病的有效措施。本研究应用基因工程技术构建了日本血吸虫核酸疫苗pVAX．GST、pVAX．GST-FABP和plRESneo．GST-FABP．Sj23，并且克隆了小鼠IL．

2、18，构建了真核表达载体pVAX．几．18。以小鼠为动物模型评价了其免疫保护效果。日本血吸虫核酸疫苗的构建运用基因工程重组技术将日本血吸虫保护性抗原基因GST、FABP、sj23克隆入真核表达载体pVAX和plRESneo中，通过酶切鉴定构建成了日本血吸虫真核表达载体pVAX-GST、pVAX．GST-FABP和pIRESneo—GST-FABP—sj23。小鼠儿．18真核表达载体的构建应用RT-PCR技术从小鼠脾淋巴细胞中扩增了小鼠的白介素．18(IL．18)，并将其克隆至pMDl8．T载体，经序列分析后将IL．18克隆至真核

3、表达载体pVAX中，构建了重组质粒pVAX．IL．18。动物免疫保护性试验将构建的日本血吸虫核酸疫苗及pVAX．IL．18以肌肉注射的方式免疫BALB／c小鼠，二次免疫后，用日本血吸虫尾蚴分别攻击感染小鼠，42天后剖杀冲虫并计数。免疫试验结果表明，日本血吸虫核酸疫苗均能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体，plRESneo．GST-FABP．Sj23+IL．18免疫组所诱导的地G水平最高；且免疫组都产生了较高水平的IFN吖，其中联合也．18组所诱导的IFN吖明显高于单独免疫组(K0．01)；在动物保护性实验中plRESneo．GST-

4、FABP．Sj23、plRESneo．GST-FABP．Sj23+IL-18分别获得了45．O％、69．8％的减卵率，40．0％、47．5％的减虫率。上述结果表明日本血吸虫多价核酸疫苗在动物免疫实验中获得了较好的免疫保护效果，并且儿．18能增强日本血吸虫核酸疫苗的免疫保护作用。关键词：日本血吸虫，IL-18，核酸疫苗，免疫ConstructionandimmunogenicityofthemultivalentDNAVaccineforSchistosomajaponicumAbstractSchistosomiasisjapo

5、nicumisoneofthemostscrionsparasiticdiseasesthatthreatenthehealthofhumanandlivestock．ThecomprehensivecontrolmeasurebasedonthechemotherapyofpraziquantelhasmadegreatachievementsforthecontrolofSchistosomiasisinChina．However,drugtreatmentdoesnotblockupthetransmissionofthe

6、disease．Therefore，itisnecessarytodevelopotherstrategiestocomplementexistingcontrolmeasures．Sinceschistosomesdonotmultiplywithinthefinalhost，avaccine，whichinducesevenapartialreductioninworm．burdens，couldconsiderablyreducepathology，limitparasitetransmissionandbelessexp

7、ensivethanrepetitivedrugtreatment，maUngitanessentialcomponentforthelong·termcontrolofschistosomiasis．Inthisstudy,DNAvaccinesincludingpVAX-GST,pVAX-GST-FABPandplRESneo—GST-FABP··Sj23wereconstructed．AndmouseIL·18WasclonedandtheeukaryoticexpressionvectorpVAX—IL-18wascon

8、structed．TheraftertheimmuneprotectionagainstSchistosomajaponicumchallengewasevaluatedinmice．ofeukaryoticexpressionvectorsTheSj23；Sj