notch通路在tgf-β1诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化中的作用

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2、文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导老师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：，神阳导师签章：、I娩吗／埘’年寻月节日目录燃煳中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯··1中文摘要Notch通路在TGF-131诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化中的作用摘要目的：上皮性卵巢癌为最常见的卵巢恶性肿瘤，其死亡率居妇科恶性肿瘤首位。卵巢癌早期不易发现，一旦出现症状多属晚期(IIHV期)，存在广泛转移。虽经过规范化治疗包括理想的肿瘤细胞减灭术和以铂类和／或紫杉醇为基础的联合化

3、疗，上皮性卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30％．40％。卵巢癌侵袭转移的发生和对化疗药物产生耐药性是造成其高死亡率的两个关键因素。上皮间质转化(epithelial．mesenchymaltransition，EMT)是一个高度保守的细胞程序，是指上皮细胞失去上皮特性获得间质细胞表型的一种生物学现象。它不仅是哺乳动物胚胎发育和器官形成的基础过程，还是肿瘤发生侵袭转移过程中的关键环节。并且越来越多的研究表明，肿瘤细胞经过EMT，可以获得多向分化等干细胞样特性，与肿瘤对化疗药物产生耐药相关。因此通过各种技术和策略干扰肿瘤细胞的E

4、MT过程有望为癌症治疗提供一个新途径，但这有赖于对EMT分子调控机制以及肿瘤发生发展机制的进一步认识。转化生长因子B(transforminggrowthfactor-13，TGF．B)是一种分泌型的多肽信号分子，在多种肿瘤组织中呈高表达，其作为EMT的一个重要诱导因子，以自分泌和旁分泌的形式作用于肿瘤细胞，诱导和维持细胞的EMT。研究发现，在诱导细胞发生完全EMT转换过程中，TGF．13需要干细胞信号通路如Notch，W州13．catemn，Ras，Hedgehog等的介导，这种现象的存在进一步提示了EMT与肿瘤干细胞

5、之间的某种关联性。但信号通路之间的串话具有环境依赖性，该现象在上皮性卵巢癌中的存在性和存在形式仍需要进一步研究的证实。本实验通过体外培养人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，以TGF．131和Notch信号通路抑制剂DAPT作为处理因素，旨在研究Notch信号通路在TGF．B1诱导上皮性卵巢癌细胞发生EMT过程中的作用，并对其作用机制进行探索，以期为上皮性卵巢癌的治疗提供新的思路和实验依中文摘要据。方法：常规培养人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，待细胞进入对数生长期，应用无血清培养基同步化24h后，按加入刺激的不同分为空

6、白对照组，TGF．B1组(iong／m1)，DAPT组(Notch信号通路的抑制剂，10uM)，TGF．131和DAPT联合处理组(10ng／mlTGF．131，10uMDAPT)，不同刺激均作用72h。1倒置显微镜：应用倒置显微镜观察细胞形态的变化。2蛋白质印迹(Westernblotting)：应用Westemblotting检测上皮细胞标记物E．cadherin，间质细胞标记物N—cadherin、Vimentin，Notch信号通路的激活形式NICD以及Notch信号通路的配体Jaggedl的表达情况。3细胞划痕

7、试验：应用划痕试验评估细胞的迁移能力，常规培养SKOV3细胞，应用无血清培养基同步24h后，先按照分组加入不同刺激作用48h后再做划痕，划痕时理想的细胞密度为形成细胞单层，观察划痕24h后不同组间划痕愈合情况的不同。4实时荧光定量PCR：待加入TGF．B1刺激48h和72h后提取细胞的总RNA，检测JaggedlmRNA的表达量。5应用SPSS13．0统计软件进行数据分析。结果：1倒置相差显微镜下观察正常培养的SKOV3细胞形态为典型的铺路石样，细胞排列规则紧凑，在TGF．13l作用72h后，细胞转换成纺锤体形，形成明显

8、的细胞伪足，且细胞排列变松散；在DAPT处理组、TGF．131和DAPT联合处理组，细胞形态均没有明显变化。2Westernblotting结果：(1)经10ng／ml的TGF—B1作用72h后，SKOV3细胞上皮细胞标记物E．cadherin(0．632-q：0．129)表达较对照组(1．000±0．000)明显降