缺氧诱导因子-1α对人上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

《缺氧诱导因子-1α对人上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文缺氧诱导因子--1α对人上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的影响姓名：曹珊申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：徐春琳201203中文摘要缺氧诱导因子-1仅对人上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的影响摘要目的：上皮性卵巢癌死亡率位居女性生殖道恶性肿瘤第一位，其5年生存率仅为30％'--'40％，严重威胁妇女健康。导致卵巢癌病人预后差的主要原因是其进展迅速，大部分患者在确诊时已有局部侵润或远处转移，以至于不能获得根治。近年来，肿瘤细胞上皮间质转化(Epithelial．MesenchymalTransition，EMT)、间质上皮转化(Mesenc

2、hymal．EpithelialTransition，MET)、微环境与肿瘤细胞的相互作用等被认为与肿瘤的侵袭转移关系密切，成为研究肿瘤侵袭转移机制的热点[1-41。肿瘤细胞发生EMT后，细胞间黏附减弱，运动能力增强，进而易于突破基底膜发生转移。而缺氧作为实体肿瘤微环境的标志性特征，在实体肿瘤进展过程中普遍存在。本课题将研究缺氧环境下HIF．1a对卵巢癌细胞EMT的诱导及侵袭能力的影响，并进一步探讨应用钙离子拮抗剂能否逆转卵巢癌细胞EMT的发生，从而改变细胞的侵袭能力，旨在从分子水平上探讨缺氧对上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化及侵袭能力改变的信号转导机制，为上皮

3、性卵巢癌的治疗策略提供实验依据。方法：用含1O％胎牛血清RPMI．1640培养基在37℃，饱和湿度5％C02的培养箱中常规培养人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV-3、人卵巢粘液性囊腺癌细胞株3AO。1．倒置相差显微镜：镜下观察常氧和经CoCl2诱导缺氧后SKOV-3和3AO细胞形态学的改变。2．MTT法：将消化后的细胞用含lO％胎牛血清的RPMI．1640培养基制成细胞悬液，以每孔5×104密度将细胞接种于96孔培养板中，每孔200p1。待细胞进入对数生长期后用不同浓度CoCl2(25、50、100、150、200“mol／L)作用不同时间(12h、24h、48h

4、)，以CoCl2Opmol／L为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞生长的影响，筛选出药物作用的最适浓度及时间。3．Westernblot检测不同浓度CoCl2(25、50、100、150、2001上rnol／L)作用SKOV-3细胞24h后HIF．1a蛋白的表达，检测50眦nol／L的CoCl2作中文摘要甩3AO细胞不同时l'司(12h、24h、48h)后HIF．1a蛋白的表达。4．Westernblot检测SKOV-3和3AO细胞各实验组中HIF．1a蛋白、Twist蛋白、E—cadherin蛋白、N-cadherin蛋白的表达情况。实验分组

5、如下：OControl组：仅以含10％胎牛血清的RPMI．1640细胞培养液培养细胞②CoCl2组：用1001xrnol／L的Cocl2作用SKOV-3细胞24h；用501amol／L的CoCl2作用3AO细胞24h③VPL组：200pmol／LVPL作用于细胞；④VPL+CoCl2组：钙离子拮抗剂Ⅵ)L作用30min后再分别加1001maol／L和509mol／L的CoCl2作用于SKOV．3和3AO细胞。5．应用24孔Transwell侵袭小室检测SKOV-3和3AO细胞的侵袭能力，实验分组：@Control组：仅以含1O％胎牛血清的RPMI．1640细胞培

6、养液培养细胞；@CoCl2组：分别用100jxmol／L和50jamol／L的CoCl2作用于SKOV-3和3AO细胞；③钙离子拮抗齐U(VPL)组：2001xmol／LVPL作用于细胞；④VPL+CoCl2组：VPL作用30min后再分别加100rmaol／L和50pmol／L的CoCl2作用于SKOV-3和3AO细胞，连续培养24小时后取出Transwell侵袭小室，用4％冰多聚甲醛固定，经HE染色，在高倍镜下计数移至微孔膜下层的细胞，测定细胞的运动和侵袭能力。6．应用SPSS13．0统计软件进行统计学分析。结果：1．缺氧状态可促进上皮细胞向间质细胞的形态转

7、变。本实验采用化学试剂CoCl2模拟细胞体外缺氧环境。在倒置相差显微镜下观察可见，CoCl2作用细胞后，其增殖活性明显受抑制。细胞形态也开始发生变化：部分细胞伸出伪足，呈多角形。细胞排列紊乱，细胞间连接较疏松；而对照组细胞呈上皮样细胞形态，细胞与细胞间的联系较为紧密。2．MTT结果显示，随着CoCl2浓度和作用时间的延长，两种细胞的存活率较对照组明显降低，差异均有统计学意义(均p<0．05)。3．Westernblot检测两种细胞中HIF．1a蛋白的表达：(1)取不同浓度(O、25、50、100、150、200IJmol／L)的CoCl2作用SKOV-3细胞24

8、h后，HIF．1a蛋白相