j亚群白血病病毒nx0101株感染性克隆化病毒构建及其生物学特性

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1、本论文受国家自然科学基金重点项目(群30330450)和国家自然科学基金面上项目(#30270060)资助关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

2、用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文储虢猫云九导师签名：霍丛冲日期：碰，L一1英文缩写注释英文缩写英文全称汉语名称山东农业大学硕士学位论文硕士期间参与的科研项目(1)参与国家自然科学基金重大项目“我国畜禽主要病毒病的分子流行病学调查(IBDV部分)”，独立完成了IBDVvp2基因高变区分子变化的研究(2)参与法国梅里亚公司资助项目性及其6个基因的分子比较”，家族的序列比较。“马立克氏病病毒中国分离株致病独立完成了12个毒株1．8kb基因(3)参与国家自然科学基金面上项目“免疫选择

3、压在禽反转录病毒遗传变异和分子演化中的作用”，独立完成了J亚群白血病病毒中国分离株NX0101的感染性分子克隆，并随之研究了它的致病性。(4)参与国家自然科学基金重点项目“鸡群中免疫抑制性病毒多重感染及其与宿主的相互作用”，合作完成了ALv—J、REV、MDV、REOV单独或者交叉感染后病毒血症的相互影响及对宿主免疫系统影响的研究。J亚群自血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其生物学特性中文摘要J亚群禽自血病病毒(SubgroupJofAviallleukosisvirus，ALV．J)是90年代初鉴定出来的禽自血病病

4、毒(ALv)新的亚群，主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。在随后几年中该病毒曾在世界范围内迅速传播。1999，我国也在肉用型鸡群中分离鉴定出了ALV．J的中国株。．ALv-J复制周期中存在前病毒形式，它可整合进宿主细胞基因组中。J亚群自血病病毒NXOIOI株是2001年从宁夏回族自治区某父母代种鸡场分离到。采用PCR方法分3段扩增出J亚群白血病病毒NXOIOI株的前病毒cDNA，PCR产物经克隆后顺次连接，获得一个含有完整NX0101株ALV-J前病毒cDNA的重组质粒，命名为pALv_J-NX。将pALV-J-NXDNA纯化后转染鸡胚

5、成纤维细胞，以针对ALV—J的单克隆抗体JE9对转染后的细胞作间接免疫荧光反应，证明获得了具有感染性的病毒。该分子克隆化病毒rNxolOl感染的CEF培养上清液中的半数组织感染量(TCID。)可达到10““TCID。／mL。分别在SPF鸡制备NXOIOI株和rNXOlOl株的单因子血清，病毒中和反应表明：两种病毒之间抗原性的同源性为100％。这是我国第一株ALV-J的感染性分子克隆。肉鸡致病性试验选用150只健康肉用型鸡，随机分为3组，每组50只，分别于1日龄经腹腔接种原始种毒NXOIOI株、rNXOIOI株和相应量的灭菌生理盐

6、水作为对照。试验期为120天。通过临床观察和定期称重来比较rNXOlOl和NXOIOI感染对肉鸡的生长性能的影响。通过测定肉鸡常规免疫后血清中新城疫抗体和传染性法氏囊抗体的变化来比较rNXOlOl和NXOIOI感染后肉鸡的体液免疫功能的影响程度，同时比较了原始野毒与分子克隆化病毒对中枢免疫器官的影响，此外还通过免疫器官的病理组织学变化以及病变组织中病毒的再分离对rNX0101作了进一步研究。研究结果表明：l接种rNXOlOl组和接种NXOIOI组肉鸡生长发育受阻，与对照组相比，体重下降极显著(P

7、，法氏囊指数和胸腺指数明显下降(P

8、引起免疫抑制并对肉用型鸡表现致瘤性。由于检测ALV—J感染有其特殊的技术要求和难度，加之临床上出现多重病毒混合感染的病例，对该病毒的检测增加了难度，结合l临床病例，初步探讨了应用PCR、免疫荧光和免疫组化的检测方法，为多重感染下病理诊断难下结论的病例提供实验室诊