人bmscs体外复合自体dbm构建组织工程软骨的实验研究

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1、万方数据中图分类号墅竖UDC610硕士学位论文学校代码!Q§3兰密级公珏人阴SCs体外复合自体DBM构建组织工程软骨的实验研究E)【per洫酬StudyonCons们lct吨TissueEngiIlee血gCaItilagesbyB砌吨Hl皿趾BMSCs觚dAutologollsDBMi11Vi仃oCultI鹏作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：易颖临床医学外科学(骨科)中南大学湘雅医学院附属海口医院金旭红副教授论文答辩日期瘁／圈答辩委员会主席中南大学二零一四年五月万方数据学位论文原创性

2、声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：—望起日期：』塑浒上月丛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有

3、关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：—越导师签名型万方数据人BMSCs体外复合自体DBM构建组织工程软骨的实验研究摘要：目的：探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)与自体脱钙松质骨基质(DBM)体外复合，构建组织工程软骨的可行性。方法：l、术中获取股骨头，利用不离心的全骨髓贴壁培养法分离人BMSCs，进行体外培养扩增，通过形态

4、学观察选用第3代细胞，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪鉴定人BMSCs。2、第3代人BMSCs，利用高密度微团诱导培养法进行成软骨诱导。21天后固定标本，进行病理组织学染色，观察糖胺多糖和II型胶原的表达来检测人BMSCs的成软骨诱导能力。3、术中获取股骨头，利用改良Urist法制成DBM，通过电镜观察和降解率等性能测定。将DBM与人BMSCs体外复合后分为2组(n=36)。实验组进行成软骨诱导培养，对照组不进行成软骨诱导。4、细胞支架复合物于第1、2、3个月取材行大体、电镜形态学观察、H—E、阿利新蓝及I

5、I型胶原免疫组化染色，利用工PP软件行II型胶原免疫组化工0D值测定并行统计学分析。结果：1、不离心全骨髓贴壁培养获取的细胞形态呈长梭状，细胞生长曲线示最佳接种浓度为5×104／m1。流式细胞仪测得细胞表面高表达CD29、CD44和CDl05，低表达CD34和CD45。标本诱导后进行阿利新蓝染色示胞质中蓝染，提示有糖胺多糖表达；II型胶原免疫细胞化示细胞外基质中可见棕褐色，提示II型胶原表达。2、DBM呈立体网状结构，孔径约340um，约12周能基本降解完全。电镜观察显示随着DBM降解，细胞处于生长分化的动

6、态过程。3、两组细胞支架复合物病理组织学染色对比，实验组阿利新蓝染色、II型胶原免疫组化呈阳性表达。II型胶原免疫组化工0D值统计学分析表明，第3个月，实验组与对照组比较有统计学意义，II型胶原的表达有差异；实验组内第3个月与前两个月比较均有统计学意义，表明II型胶原的表达存在差异。结论：1、第3代人BMSCs适合作为软骨组织工程的种子细胞。2、人BMSCs与自体DBM体外复合后进行成软骨诱导，具备一定的组织工程软骨特性。全文图45幅，表2个，参考文献73篇。关键词：组织工程；BMSCs；DBM；成软骨诱导

7、分类号：610Ⅱ万方数据ExperimentalStudyonConstructingTissueEngineedngC矾lagesbyBindingH啪anBMSCsandAu幻logousDBMiIlVi订oCultureAbStraCt：ObjectiVe：ThestudyaimstoinVestigate协efeaSibilityofconstrIlctingtissueengilleeringcartilagebyculturinghumanbonemesenchyma王stemcells(BMS

8、Cs)锄daut01090usde面neralizedbonematrix(DBM)inVi缸o．Methods：1，HumaIlBMSCswereisol缸edbVthemethodofnon—cenl矗她alwholebonemarrowadherentculture丘．om廿1epatie觚’femoralbonescollectedsu唱ically'andwerefollowedbyinvi臼．oamp