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1、大蒜素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制张玉碧1吕林华2吕立华屮(1邵阳市中心医院血液肿瘤科湖南邵阳422000)(2中山大学附一院广东广州510080；3邵阳医学高等专科学校药学系湖南邵阳422000)【中图分类号】R735.7【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)47-0231-02【摘要】目的探讨大蒜素对体外培养的人肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用及其分子机理。方法采用TUNEL法检测大蒜素对HepG2细胞凋广的影响，提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究大蒜素对Bcl-2基因表达的影响。结果大蒜素使人HepG2细胞凋亡指数增
2、加(P<0.01),冃呈剂量依赖效应;Bcl-2基因mRNA水平随大蒜素浓度升高而降低。结论大蒜素可促进人HepG2细胞的凋亡过程，并使Bcl-2基因mRNA水平降低，从而起到抗肿瘤的治疗作用•探讨大蒜素体内外诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的作用及机制。【关键词】大蒜素肝癌HepG2细胞细胞凋亡Bcl-2mRNATheEffectofAllicinonAPoPtosisofHumanLiverCancerCellHePG2inVitroandItSMechanism【Abstract]ObjectiveToinvestigatethePromtionofAllic
3、inonAPoPtosisofHumanLiverCancerCellLineHePG2inVitroandItSMeChanism.MethodsTodetecttheeffectontheapoptosisbyTUNELmethod,toobservetheeffectontheBcl-2geneRNlevelbyRT-PCRmethod.ResultsAllicinmadeindexinereaseinadose-dependentmanner(P<O.01).ThelevelofmRNAofBcl-2geneinereasedastheconcentrati
4、onofAllicindecreased.ConelusionAllicincanfacilitatetheapoptosisofHepG2cellandmakethelevelofMrnaofBcl-2decreased.[Keywords】AllicinLivercancercellApoptosis大蒜素是从大蒜球茎中提取的含硫化合物，具有强大的抗炎作用⑴,近年研究发现大蒜素具有防癌、抗癌的特点［2］。本文通过研究体外诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的作用的影响，以及检测大蒜素对Bd-2因表达水平的影响,研究其抗肿瘤的机理，为更好地发大蒜素的临床应用价值提供理论与实
5、验依据。1材料HepG2细胞株;DMEM培养基（美国Hyclone）；小牛血清（杭州四季青公司）；Tunel试剂盒（南凯基生物科技发展有限公司）；大蒜索（邵阳医学高等专科学校药学系，0・5"1,乙醇法提取）。BCL-2基因引物由宝泰克生物技术公司合成；RT-PCRkit（宝生公司）;PCR扩增仪（MinicvclerM7Research）o2方法2.1细胞培养将HepG2细胞培养在含量10%小牛血清的DMEM培养基中，培养条件：37°C、100%湿度、5%CO2、95%空气，每24h换液1次。2.2TUNEL检测细胞凋亡将5×107/L细胞悬液接种于35mm培
6、养皿，将用多聚赖氨酸处理的无菌盖玻片置于培养皿内，37°C,5%CO2,培养箱中培养，使细胞自然在盖玻片上贴壁生长。24h后分别加人无菌的大蒜素溶液（0.5g/L）10,20,30,40,50μL,使最终浓度分别为50,100,150,200,250mg/L,各组设3个重复，对照组加100&mu儿培养液，在37°C,5%CO2条件下继续培养48ho弃培养皿内的培养液，37°C,PBS轻洗3次，以4%聚甲醛固定。按照原位凋亡细胞检测试剂盒说明书行操作。结果判断标准:在光学显微镜下观察，胞核成棕红色，胞质中有散在较浅着色的细胞为凋亡细，计数至少1000个细胞。凋亡指数二
7、凋亡细胞数/细胞数×100%o2.3RT-PCR检测Bcl-2基因mRNA表达取培养24h后的HepG2细胞，以Trizol法提取总RNAo逆转录和PCR扩增按RT-PCR试剂盒说明书进行，PCR扩增体系为50μL。Bcl-2>GAPDH的引物由宝泰克生物技术公司合成。Bcl-2mRN探针序歹叽5’・GGAGCGTCAACAGGGGATTG-37,5’-GATGCCGGTCAGGTACTCAG・3‘上游引物和下游引物务2μL,Taq酶2U,与逆转录产物cDNA混匀，瞬时离心;扩增条件：94°C2min、
