cd147调控阿霉素介导的乳腺癌细胞凋亡的研究

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1、中图分类号＆鱼551墨UDC61O硕士学位论文学校代码密级10533CDl47调控阿霉素介导的乳腺癌细胞凋亡的研究ResearchontheregulationofCD147intheadriamycin．mediatedpoptosisapoptosls0nMCF．7一M乙■一，作者姓名：王平虎学科专业：临床医学研究方向：外科学(乳腺外科)学院(系、所)：中南大学湘雅医院指导教师：毛杰教授论文答辩日期Z：l}：嗒：孑●答辩委员会主席中南大学二零一三年五月一令一二，牛直月原创性声明IYTIIIqlll2lllll

2、4lllllll211lllllll7TIkll4lqllll6llTIIY2421746本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：嘲学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定

3、送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。摘要背景CDl47调控阿霉素介导的乳腺癌细胞凋亡的研究CDl47是一种重要的肿瘤基因治疗的靶分子，在多种肿瘤细胞中高表达，诱导肿瘤细胞及基质细胞产生M^口s、VEGF，与MCT、Integrin、Cyclophilins、Caveolin一1相互作用，影响着肿瘤的侵袭转移及血管新生，并在

4、肿瘤的凋亡、多药耐药形成中发挥重要的作用。CDl47与乳腺癌密切相关，在乳腺癌中高表达，与乳腺癌的病理分级及淋巴结转移相关联，并与乳腺癌患者生存期相关，有Logistic回归分析显示患者的生存期会随着CDl47高表达而缩短。研究CDl47是否调控化疗药物诱导的乳腺癌细胞的凋亡对乳腺癌的治疗具有一定的意义。目的探讨CDl47对阿霉素介导的人乳腺癌MCF．7细胞凋亡的影响。方法1．将含有CDl47及GFP全长cDNA的质粒用瞬时转染的方法转入乳腺癌MCF．7细胞，并设置空载(仅含GFP全长cDNA)质粒转染组作为对照

5、。用Westemblot的方法检测CDl47转染组及空载质粒转染组细胞中CDl47蛋白水平的变化、用荧光显微镜观察CDl47转染组MCF一7细胞的GFP表达情况，以验证CDl47质粒是否成功转入MCF．7细胞．2．将CDl47质粒用瞬时转染的方法转入乳腺癌MCF．7细胞，并设置空载质粒转染组作为对照。随后以不同浓度的阿霉素处理两组II细胞，时间为48h。MTT法测定不同浓度的阿霉素对两组细胞增殖的影响。3．用流式细胞仪检测CDl47转染组邯可霉素，空载组+阿霉素细胞的凋亡。4．将CDl47转染组及空载质粒转染组细

6、胞加入不同浓度阿霉素(OpM、1“M)，分别标记为：CDl47转染组、空载组。用Westemblot的方法检测各组细胞中CDl47，CleavedPARP蛋白水平的变化。结果1．Westemblot试验证实人乳腺癌细胞株MCF．7细胞无CDl47表达，CDl47质粒成功转入MCF．7细胞并表达CDl47。荧光显微镜下观察CDl47转染组MCF．7细胞表达绿色荧光蛋白，也验证了CDl47质粒成功的转染入MCF．7细胞。2．MTT的结果表明：阿霉素能抑制MCF．7空载组细胞、CDl47转染组细胞的增殖能力，并且随阿霉

7、素浓度的增加，抑制能力也逐渐增强。在相同浓度下，阿霉素对MCF一7空载组细胞抑制率高于CDl47转染组细胞。MCF．7空载组细胞IC50=1．579+0．0257pM，CDl47转染组细胞IC50=2．2044-0．0391州。说明CDl47对MCF．7细胞的凋亡有抑制作用。根据IC50的值，选取lpM的阿霉素进行后续的细胞凋亡实验。3．流式细胞仪检测CDl47转染组MCF．7细胞的凋亡率为8．38士1．09％，明显低于空载组(P

8、的凋亡有抑制作用。4．5可霉素(0pM、lpM)处理空载组细胞及CDl47转染组细胞48h后，其两组细胞CleavedPARP表达水平随阿霉素浓度增加均上III调，CD147转染组细胞CleavedPARP表达上调趋势明显低于空载组。结论l、CDl47调控了阿霉素介导的人乳腺癌细胞株MCF．7的凋亡。+2、CDl47可能是一种新的乳腺癌化疗相关靶分子。关键词乳腺癌，CDl