表阿霉素和阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡

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1、表阿霉素和阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡作者：马祖胜，冯英明，姬统理，张贺龙，唐敏章，王文亮，郭双平【关键词】肝肿瘤　　关键词:肝肿瘤;细胞凋亡;表阿霉素;阿霉素　　摘要:目的观察和比较表阿霉素和阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的作用，为临床治疗肝癌的药物选择提供依据.方法用20μmolL-1表阿霉素和阿霉素分别作用于人肝癌细胞株HCC-9204细胞3h，换液继续培养8h.用细胞形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪判定细胞凋亡情况.结果表阿霉素和阿霉素分别作用于HCC-9204细胞11h后，细胞形态学改变均符合凋亡细胞特征.凋亡细胞分别占细胞总数的13.

2、8%和13.1%.MTT试验示各实验组与空白对照组间比较相差显著，表阿霉素和阿霉素相同剂量处理组之间比较无显著差异.细胞周期检测表阿霉素组G1期、G2期和S期分别为56.4%，10.4%和38.2%，阿霉素组分别为61.1%，8.6%和30.3%，对照组为31.1%，61.9%和6.0%.结论表阿霉素和阿霉素均能有效地诱导人肝癌细胞株HCC-9204细胞发生凋亡，无明显差异.　　Epirubicinanddoxorubicininducedapoptosisofhu┐manhepaticcancercells　　Abstract:AIM

3、Toprovidethepossibilityforchoiceofdrugsinclinicaltherapyofhepaticcancer，anhepaticcancercellstrainolL-1）anddoxorubicin（20μmolL-1）for3hrespec-tively.Thenthemediumorphology，DNAelec-trophoresisandfloetry.RESULTSMTTassayindi-catedasignificantdifferencebetentalgroupsandtheblan

4、kcontrolgroup.Thepercentageofapoptoticcelletryidentifiedpeakstypicalofapoptosis.CellsinG1，G2andSphaseofcellcycle-etryandthemorphologicalobscervation.　　0引言　　细胞凋亡（apoptosis），是受基因调控、细胞主动参与其自身有一定程序的生理性死亡过程，又称为程序性细胞死亡或细胞自杀［1］.已知许多化疗药物主要通过诱导肿瘤细胞凋亡达到清除肿瘤的目的［2，3］，表阿霉素和阿霉素是治疗肝癌的常

5、用药物，为比较表阿霉素和阿霉素对肝癌细胞凋亡的诱导作用，我们应用表阿霉素和阿霉素对培养的人肝癌细胞株进行诱导其发生凋亡的研究，探讨表阿霉素和阿霉素对肝癌细胞诱导凋亡的机制，为临床治疗肝癌的药物选择提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料　　表阿霉素由法码西亚-普强公司提供;阿霉素购于深圳万乐公司;MTT，RNaseA和蛋白酶K购于Sigma公司;PCD-AKP标记盒购于BoehringerMannhEim公司;人肝癌细胞株HCC-9204由本校基础部病理学教研室提供.　　1.2方法　　将培养的HCC-9204肝癌细胞制成单细胞悬液，以每

6、孔104个细胞接种于进口96孔培养板中，每孔体积200μL，CO2孵箱中培养2～3d，倒置显微镜下观察，待每孔细胞生长至对数生长期时，4℃放置1h，分别加不同浓度的表阿霉素和阿霉素.每6孔为一组，浓度相同.实验组分别为表阿霉素组和阿霉素组，剂量分为40，20，10和5μmolL-1.对照组为未加药物的空白对照.实验组加药培养3h，移去药液，洗净药液后换培养液继续培养6h，每孔加新鲜配制的MTT（5gL-1）20μL作用4h，出现蓝色结晶，加二甲基亚砜150μL，振荡10min.比色用酶联免疫检测仪于490nm波长测定吸光度值，每组6个孔

7、取均值，计算标准差，用方差分析进行统计学处理，比较各组间是否相差显著.待HCC-9204肝癌细胞生长至对数生长期，放置4℃1h，使细胞生长同步化，根据上述MTT试验结果，分别用4mL含20μmolL-1表阿霉素、阿霉素的培养液作用3h，移去药液换培养液继续培养8h，倒置显微镜观察HCC-9204肝癌细胞约凋亡1/2～1/3，终止培养.收集已处理的培养瓶中细胞（1×107），酚-氯仿法提取DNA，用1.8gL-1琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察DNA电泳结果.　　1.2.1流式细胞仪检测　　收集各组肝癌细胞，制备单细胞悬液，乙醇

8、固定，4℃过夜，生理盐水洗涤，离心2次，100μL约1×106个单细胞悬液中加碘化丙啶染色液300μL作用15min，EPICSProfileⅡ型流式细胞仪检测，观察各组是否存在凋亡细胞并测定其含量、各细胞