壳聚糖季铵盐对戊型肝炎病毒多肽疫苗免疫效果影响的研究

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1、万方数据论文题目：壶塞糖重筮盐跹鹰型旺盔痘塞垒然痊苴免疫筮墨髭喧数巫宜答辩委员会主席：答辩委员会成员：论文答辩日期：二睦一回缉五同-t一日万方数据目录荚文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．

2、1茸株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．2实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．3实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．101．4主要试剂配方。1．4．1蛋白诱导表达相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．111．4．2蛋白纯化相关试剡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．4．3蛋白复性相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．141．4．4SDS-PAGE蛋白凝胶电泳相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。15114．5蛋白免疫印迹相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1．4．6ELIS

3、A-IgG相关试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．4．7流式细胞术相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。192．实验仪器．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。203．实验方法⋯⋯⋯。3．1HEV重组蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l3．2HEV重组蛋白的纯化和复性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24万方数据3．2．1HEV重组蛋白的粗纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯243．2．2HEV重组蛋白的NI柱纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．243．2．3蛋白的复性和浓缩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯253．2．4SD

4、S．PAGE蛋白电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．2．5Westernblot检测重组蛋白的抗原性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．2．6Bradford法测HEV重组蛋白含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。293．3HTCC溶液的准备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．4动物免疫方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯313．4．1动物分组与处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．313．4．2免疫注射剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．313．4．3动物免疫⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯313．4．4动物采血及血清的分离⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。313．5ELISA检测免疫小鼠血清中抗HEVIgG抗体水平⋯⋯．343．6小鼠T淋巴细胞的增殖反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．353．7流式细胞术检测免疫小鼠全血中的CD4+、CD8+、IFN-y+和IL4+细胞百分率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．363．8统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37结果⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．HEV重组蛋白的表达、纯化、复性和鉴定结果⋯⋯⋯⋯⋯。381．1HEV重组蛋白在大肠杆菌中表达形式的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯

6、381．2HEV重组蛋白的纯化和复性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．3HEV重组蛋白的抗原性的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38万方数据1．4HEV重组蛋白浓度的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382．Balb／c小鼠血清中抗HEV-IgG抗体水平的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯413．T细胞增殖反应的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯424．流式细胞术检测全血中CD4+、CD8+、IFN-y+和IL-4+细胞百分率结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。42分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44，J、

7、l皓⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。47致司}⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．50综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。51学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62万方数据英文缩略词编写英艾名称中丈名称APSAminoniumpersulfate过硫酸铵BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白ConAConcanavalinA刀豆蛋白ACSChito

8、san壳聚糖CTA3一chloro一2一hydroxypropyltrimethyl3一氯一2一羟丙基一三甲基ammoniumchloride氯化铵ddH，0Doubledistilledwater双蒸水E