拟南芥中与ga20ox1基因启动子互作的转录因子筛选及功能初步研究

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1、学校代号：学号：密级：10532Sll221005湖南大学硕士学位论文拟南芥中与GA200xl基因启动子互作的转录因子筛选及功能初步研究堂僮由道厶挂名；匮毯红昱垣蛙名壁驱整!割选盟熬援墙．．羞望僮i．生物兰瞳～一童一些名整!．．生物垡堂皇筮王生塑堂迨窒握窒旦塑12Q!垒生5旦2鱼旦迨室簦整旦塑：2垒!垒生墨旦22旦筌整蚕基金圭虚；睦良碧熬援ScreeningandPreliminaryFunctionalAnalysisofTranscriptionFactorsInteractingwithGA200xlpromoterinArabidopsisbyD

2、uanQiuhongB．S．(JianxiUniversityofTraditionalChineseMedicine)201AthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnBiochemistry&MoleculeBiologyintheGraduateSchoolofHunanUniversitySupervisorProfessorLIUXuanmingMay，2014湖南大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在

3、导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。储签名：酬乙吼训年易月矿日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论

4、文属于1、保密口，在——年解密后适用本授权书。2、不保密囹。、(薄在以上相应方框内打“4”)作者签名：佟书扯3x日期：萨砷年易月矽日刷谧轹嗍嗍：川引聃日硕士学位论文摘要赤霉素是一类重要的植物激素，它参与调节植物生长发育的各个阶段。真核基因的表达受多种因素的调控，其中启动子在转录水平上的调节作用至关重要。转录因子与基因启动子结合调控基因的表达。但是目前较多的研究在于分析GA200x基因在赤霉素代谢途径中的作用，对拟南芥GA200x基因家族上游顺式元件与启动子的详细分析较少，故以此展开研究并获得以下结果：(1)采用生物信息学分析了霉素关键酶基因家族，结果表明

5、霉素关键酶基因家族具有相对集中的染色体分布；具有相似的内含子和外显子结构；基因家族成员进化关系越相近，模体和顺式元件则越保守且分布位置更接近。存在许多保守元件如组织器官特异性、光、激素响应元件；基因芯片分析表明赤霉素关键酶受激素调控，组织器官表达模式分析获得各基因表达谱，结果表明这些基因在各个组织部位均有表达，较高表达量集中在花与果荚。AtGA200x基因家族分为2个亚类；AtGA200x在花与果荚组织中的表达量最高；AtGA200x基因启动子区域主要有光、激素顺式作用元件，同时具有多个MYB的结合元件。(2)通过酵母单杂交的方法，从拟南芥转录因子库中筛

6、选到与AtGA200xl启动子互作的转录因子AtMYB32。采用了CPRG法定量分析测定AtGA200xl启动子与AtMYB32相互作用的强度，结果显示二者的相互作用强。(3)成功构建原核表达载体pColdTF／AtMYB32，探索融合蛋白表达的最佳诱导条件，结果表明IPTG终浓度0．6mmol／L、18"C诱导6h时获得融合蛋白的高效表达，可溶性分析表明融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达，通过亲和层析纯化，获得纯化上清总蛋白，并以Westernblot检测证实获得了高纯度的重组融合蛋白。(4)AtMYB32含有两个R2R3的保守结合域，分析了AtMYB

7、32基本理化性质，预测彳谢yB32蛋白可能定位在细胞核，亚细胞定位证实AtMYB32位于细胞核中，基因芯片数据库与实时荧光定量PCR技术的分析组织表达模式，结果表明彳fM旧32在各个组织均有表达，且均显示在花与果荚中表达较高。(5)构建了过表达载体35S：：AtMYB32．GFP、pAtMYB32：：GUS，并用浸花蕾法将其导入拟南芥，获得了35S：：AtMYB32．GFP的转基因植株。(6)在光、激素、盐等胁迫处理下，分析AtMYB32基因表达量变化，结果显示AtMYB32受蓝光、红光、远红光的诱导，同时对激素与盐等逆境做出响应。关键词：生物信息学；酵

8、母单杂交；AtGA200x：AtMYB32：原核表达；过表达拟南芥中与GA20饵