tclr35小麦中nbs类抗病基因同源序列的分离及鉴定

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1、分类号：墨垒三§：121：箜密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：2Q!Q垒Q!TcLr35小麦中NBS类抗病基因同源序列的分离及鉴定IsolationandidentificationofNBStyperesistancegeneanalog’TcLr35wheatanalogsinICLr3Wheat学位申请人：梁丽然指导教师：王海燕副教授刘大群教授学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或

2、撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦壅些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：渠诵逸签字日期：Ⅻl弓年6月z日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰堡盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：珲晶遮导师签名：抽每、签字日期：如

3、哆年(月一FI签字日期：如f乡年6月≥FI学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要小麦叶锈病是我国小麦生产中的主要病害之一，选育抗病品种是防治小麦叶锈病最经济有效的途径。发掘抗叶锈病相关基因及其紧密连锁的分子标记，是进行基因聚合、基因布局和多系品种选育的关键。本研究利用NBSprofiling技术和抗病基因同源序列(RGA)法在TcLr35等小麦抗叶锈病近等基因系材料中分离NBS—LRR类抗病基因同源序列。主要研究内容包括以下几个方面：1．以小麦抗叶锈病近等基因系TcLr35和感病亲本Thatcher为材料，分别在基因组DNA和cDNA中成功构建了NBSprofiling体

4、系。2．选取15个回交6代小麦抗叶锈病近等基因系(NILs)及其感病亲本Thatcher基因组DNA为模板，4种限制性内切酶(AluI、胁PIII、MseI、RsaI)和4种简并引物(NBS2、NBS3、NBS5、NBS7)共16种酶／引物组合，利用NBSprofiling技术进行DNA指纹图谱分析。结果表明：MseI／NBS2、MseI／NBS5、MseI／NBS7均得到了较好扩增结果，多态性检出率分别为26．4％、26．4％、23．5％：AluI／NBS3、胁PIII／NBS3、MseI／NBS3、RsaI／NBS3扩增背景一致，在检测材料间未表现多态性。3．选取4种限制性内切酶(彳觑I、

5、胁eIII、MseI、RsaI)和13种简并引物(S1、S2、Ploop4、NBS2、NBS3、NBS5、NBS5a、NBS6、NBS7、NBS9、KINl、KIN5、GLPL4)共52对酶月I物组合，分别在TcLr35和感病亲本Thatcher基因组DNA和cDNA中筛选差异片段，最终在TcLr35中获得6条特异性条带。4．利用抗病基因同源序列(RGA)法和电子克隆在TcLr35小麦中获得了一条通读的抗病同源基因，该基因长1419bp，包含1323bpORF区，编码440个氨基酸，含有NB．ARC保守结构域和两个典型的LRR保守结构域，暂命名为TcLr35．$11All。系统进化树分析表明，

6、其编码蛋白和大麦、燕麦中的NBS—LRR类抗性蛋白亲缘关系较近。利用半定量RT；PCR技术分析，结果表明在取样范围内，TcLr35一$11All基因的表达不受叶锈菌的诱导，属于低丰度组成型表达，与大多数此类基因表达模式类似。关键词：小麦；NBSprofiling；抗病基因同源序列(RGAs)；电子克隆；半定量RT-PCRIsolationandidentificationofNBStyperesistancegeneanalogsinTcLr35wheatAuthor：LiangLi-ranMajor：．PlantPathologySupervisors：AssociateprofessorW

7、angHai·yanProfessorLiuDa-qunAbstractWheatleafrustdiseaseisoneofthemajordiseasesinwheatproductioninChina．BreedingresistantcultivarsiSthemosteconomicalandeffectivewaytocontrolthisdisease．Itisimportantto