mir-148a在膀胱癌组织中的异常表达及初步临床意义探讨

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：盟迅：!垒昼垒垄膻膛疸缉织坚的昱堂麦达盈塑生温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯．28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49温州医学院硕士学位论文miR-148a在膀胱癌组织中的异常表达及初步临床意义探讨中文摘要目的采用Trizol提取膀胱上皮移形细胞癌(TCCB)及正常膀胱粘膜组织(NBE)的总RNA，采用实时荧光定

3、量PCR方法检测miR-148a在TCCB组及NBE组织中的相对表达量，分析比较miR-148a在两组间的相对表达量是否有显著性差异，并进一步结合临床资料来分析TCCB组不同病理分级之间以及不同临床分期组之间miR-148a的相对表达量是否具有统计学意义。对miR．148a在膀胱癌组织中的临床意义进行初步探讨，并为进一步研究miR-148a在膀胱癌发生发展过程中可能的作用机制奠定基础。方法1．从2011年到2012年，采集温州医学院附属第一医院及浙江大学附属浙二医院泌尿外科诊疗中心膀胱肿瘤患者标本，按照膀胱癌临床诊断标准收集BCa组织66例为实验组，经病理证实

4、均为膀胱上皮移形细胞癌(TCCB)，以及外伤性膀胱破裂患者正常膀胱粘膜组织18例为对照组，经病理证实均为正常膀胱粘膜组织(NBE)。标本取得后迅速冷冻于液氮中，随后放置于一80。C低温冰箱中储存备用。2．采用美国Invitrogen公司的T对Zol@ReagentKit对膀胱癌组织和正常对照粘膜组织进行总RNA的抽提，流程步骤为：组织匀浆、分离相、RNA沉淀、RNA洗涤和RNA溶解。操作过程严格按照原装试剂盒的说明书进行操作。采用ThermoNanoDrop2000分光光度计(美国Thermo公司)对总RNA浓度及纯度进行检测。3．采用美国ABI(Applie

5、dBiosystems)公司的TaqMan@MicroRNAReverseTranscription瞄t试剂盒及TaqMan@MicroRNAAssays的特异性引物miRNA．SpecificRTprimer进行逆转录过程，把总RNA逆转录成eDNA，整个准备过程需要在冰上操作。使用美国ABI公司的steponeplus实时荧光定量PCR仪进行逆转录反应过程，反应条件为：16℃30min；42℃30min；85℃5min：4"C∞。逆转录后的产物直接用于PCR扩增过程。温州医学院硕士学位论文4．采用美国ABI公司的TaqM舻MicroRNAAssays试剂盒

6、进行PCR扩增过程：PCR反应体系需要加入TaqMan@MicroRNAAssays的上下游引物及探针miRNA-specificforwardPCRprimer，reversePCRprimer和TaqmanMGBprobe的混合物，内参U6和miR．148a的逆转录引物，以及TaqMan固UniversalMasterMixII(NoUNG，即不含尿嘧啶．N．糖苷酶)。反应体系所有试剂需要在冰上准备，整个体系不能有气泡存在。扩增过程利用美国ABI公司的steponeplus型实时荧光定量PCR仪进行，扩增循环参数如下：95。C，10rains；95℃，15

7、s，60℃，60s，一共40个循环。5．扩增结束后适当调整基线，扩增曲线与基线的交叉点即为Ct值(Cyclethreshold))。根据各样本miR-148a和所对应U6的Ct值，采用相对定量方法计算原组织标本中miR-148a的相对表达量，结果表示为2-aCt(ACt=-CtmiR_148a．Ct06)。6．用SPSSl7．0软件对数据进行统计学分析：各分组相对表达量呈偏态分布用中位数(四分位数)表示，不同膀胱组织类型miR一148a的表达差异用完全随机设计两样本比较的Mann-Whitney∥检验；TCCB组中不同病理分级间的差异用Kruskal—Wall

8、isⅣ秩和检验；TCCB组不同临床分期