水飞蓟宾干预棕榈酸诱导骨骼肌细胞胰岛素抵抗作用的研究

《水飞蓟宾干预棕榈酸诱导骨骼肌细胞胰岛素抵抗作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、DissertationSubmittedtoZhejiangUniversityofTechnology⑧fortheDegreeofMaster一‘1‘p一⋯’‘‘●一⋯‘‘InterventionOtSilibinininInsulinResistanceinSkeletalMuscleCellsInducedbyPalmitateCandidate：YingDingAdvisor：HanbingLiCollegeofPharmaceuticalScience，ZhejiangUniversityofTechnologyMay，2014浙江工业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所提交的

2、学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。作者签名：丁嚣Fill：≥f幛f月2]日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或

3、扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。(请在以上相应方框内打“d”)作者签名：丁至刷磁名专以广=，Jt卫日期：力牌年日期：≥牌年岁月2]日妇习日／浙江工业大学硕士学位论文水飞蓟宾干预棕榈酸诱导骨骼肌细胞胰岛素抵抗作用的研究摘要目的：探究体外培养C2C12骨骼肌成肌细胞的增殖分化过程及特征，优化培养分化条件，建立基于荧光标记的葡萄糖转运模型，利用棕榈酸孵育诱导骨骼肌细胞胰岛素抵抗，探讨水飞蓟宾对胰岛素抵抗的干预作用及相关机制。方法：(1)用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养C2C12细胞，通过形态学考察来检测其增殖状况；待细胞成长到

4、汇合至80～90％，用含1％胎牛血清(v／v)和含2％马血清(v／v)的培养基分别诱导细胞分化，倒置相差显微镜观察细胞形态变化。Hoechst染色，荧光显微镜观察：(2)利用荧光探针2-NBDG表征骨骼肌细胞摄取葡萄糖，应用酶标仪和荧光显微镜考察细胞对2-NBDG的转运，评估其作为光学探针检测骨骼肌细胞摄取葡萄糖的能力确定其最佳作用浓度和最佳作用时间；(3)棕榈酸孵育骨骼肌细胞16h，通过考察骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对葡萄糖的转运，评价饱和脂肪酸棕榈酸对骨骼肌细胞胰岛素敏感性的影响，建立胰岛素抵抗模型：(4)考察骨骼肌细胞葡萄糖摄取和葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达和转位的变化：利用West

5、ernblot检测胰岛素信号转导通路关键环节AKT、p-AKT(Ser473)、p-IRS—l(Ser307)和相关丝氨酸苏氨酸蛋白激酶p-JNK、p-igaq3、p-PKC一0的表达，同时分析细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)和活性氧(ROS)的变化，探讨水飞蓟宾改善饱和脂肪酸诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用机制。结果：(1)正常C2C12细胞呈梭形，诱导分化过程中多个细胞发生融合成一个细胞，并且细胞呈现极性，规律性的沿一个方向逐渐平行排列，形成肌管，Hoechst染色可见多个细胞核。2％的马血清诱导细胞分化形成的肌管较为粗壮，数量较少，l％的胎牛血清诱导细胞分化形成的肌管较为细长，但数量较多。

6、(2)肌管摄取2-NBDG最佳浓度为100“mol·L～，最佳时间为30min。(3)与对照组比较，0．75raM棕榈酸孵育后，骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对葡萄糖的摄取显著减少，细胞内总的GLUT4的表达没有显著变化，膜上GLUT4的表达显著减少。(4)与模型组相比较，水飞蓟宾能剂量依赖性地增加胰岛素刺激下骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取和浙江工业大学硕士学位论文细胞膜上GLUT4的表达；水飞蓟宾能显著增加胰岛素刺激下p-AKT(Ser473)的表达，且这一效应能被P13K选择性抑制剂Wortmannin逆转：水飞蓟宾能显著降低棕榈酸孵育引起的p-IRS．1(Ser307)表达增加，同时水飞蓟宾显著降低

7、棕榈酸引起的骨骼肌细胞p-JNK、p-IKKl3高表达，而棕榈酸和水飞蓟宾孵育过程中p-PKC一0的表达无显著性差异。0．75mM棕榈酸孵育后的骨骼肌细胞LDH、ROS产生增加，细胞活力下降，水飞蓟宾能显著改善上述的变化。结论：(1)成肌细胞体外增殖速度较快，分化可控且形态变化明显，分化后具有成熟骨骼肌细胞特性，可用于建立胰岛素抵抗模型。2％的马血清诱导细胞分化形成的肌管较为粗壮，数量较少，有利于