人乳腺肿瘤干细胞的分离培养鉴定及低氧对乳腺肿瘤干细胞特性影响的研究

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：宁夏医科大学硕士研究生学位论文人乳腺肿瘤干细胞的分离培养鉴定及低氧对乳腺肿瘤干细胞特性影响的研究ThestudyofIdentificationandcultivationofhumanbreastcancerstemcellsandtheeffectsofhypoxiaoncharacteristicsofbreastcancerstemcells学位申请人：何亚琴指导教师：贾伟副教授合作指导教师：王立斌副教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：肿瘤干细胞所在学院：宁夏医科大学检验学院论文完成日期：二0一三年

2、四月宁夏医科大学研究生部NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeThestudyofIdentificationandcultivationofhumanbreastcancerstemcellsandtheeffectsofhypoxiaoncharacteristicsofbreastcancerstemcellsName:HeYaqinSupervisor：JiaWeiAssistantsupervisor:WangLibinSubjectCategory:MedicalScienceMajo

3、r:ClinicalLaboratoryDiagnosticsSpecialty:CancerStemCellsSchool:NingxiaMedicalUniversityCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导

4、师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生论文中文摘要人乳腺肿瘤干细胞的分离培养鉴定及低氧对乳腺肿瘤干细胞特性影响的研究中文摘要乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，属高发病

5、、高死亡率疾病。肿瘤术后出现较高的复发率和转移率，同时伴有对放化疗的抗药性是其高死亡率的原因之一。近年来肿瘤干细胞理论的提出突破了以往对肿瘤发生发展的认识，认为肿瘤的发生以及对放化疗的抗药性源于肿瘤组织中的肿瘤干细胞。这一肿瘤发生的模型很好的解释了肿瘤治疗失败的原因，也从细胞学的角度提出了肿瘤研究和治疗的靶点，为临床根治肿瘤提供了理论依据。为此本研究拟从原代培养的肿瘤细胞中获得能持续传代的肿瘤干细胞克隆，体外培养鉴定其自我更新能力，明确其表面标志物。观察该细胞对低氧微环境的敏感性，并对乳腺肿瘤干细胞的低氧微环境进行初步的探索。希望为临床乳腺肿瘤的治疗提供实验依据，为乳腺肿瘤的诊

6、断和治疗提供新的思路。第一章人乳腺肿瘤干细胞的分离培养及鉴定目的：体外分离、培养乳腺肿瘤干细胞，并鉴定其生物学特性。方法：收集临床术后乳腺癌患者的肿瘤组织，经机械剪切联合酶消化法获得肿瘤细胞并培养，流式细胞仪鉴定细胞表面抗原，MTT比色法检测细胞生长曲线，实时定量PCR（qPCR）鉴定细胞Sox2、Nanog等基因表达，免疫荧光检测细胞特异性蛋白Bcl-2、孕激素受体(PR)、VEGF、KI-67、E-cadherin的表达。结果：所获得的细胞呈克隆球样形态生长，鉴定结果发现其具有+-CD44/CD24表型，该细胞高表达Sox2、Nanog基因，且Bcl-2、PR、VEGF、K

7、I-67、E-cadherin蛋白均阳性表达；结论：人乳腺肿瘤组织中存在具有自我更新和增殖能力、+-表达CD44/CD24的乳腺肿瘤干细胞，并能在体外长期培养。第二章低氧与常氧培养条件下肿瘤干细胞特性影响比较实验目的：对第一部分实验鉴定获得的乳腺肿瘤干细胞在低氧条件环境培养及正常条件环境宁夏医科大学硕士研究生论文中文摘要培养观察两种条件下乳腺肿瘤干细胞特性表达差异研究。方法：在不同的培养箱条件下培养细胞，流式细胞术鉴定不同条件下乳腺肿瘤干细胞表面抗原表达，MTT比色法检测不同条件下细胞生长曲