黄芩苷激活mrtf-a介导的抗缺血性脑神经细胞凋亡作用及机制研究

《黄芩苷激活mrtf-a介导的抗缺血性脑神经细胞凋亡作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号学号201109710027学校代码10488密级硕士学位论文黄芩苷激活MRTF-A介导的抗缺血性脑神经细胞凋亡作用及机制研究学位申请人：王锋学科专业：劳动卫生与环境卫生学指导教师：胡霞敏教授答辩日期：2014年5月万方数据ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterinMedicineBaicalinPromotingNeuronalSurvivalagainstHypoxia-inducedApopt

2、osisviaTriggeringMRTF-A-mediatedMCL-1andBCL-2ExpressionMasterCandidate：FengWangOccupationalandEnvironmentalMajor：HealthSupervisor：Prof.XiaminHuWuhanUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei430081,P.R.ChinaMay,2014万方数据万方数据摘要目的：在整体及细胞水平研究黄芩苷对缺血性脑神经元损伤的保护作用，并探讨其激活M

3、RTF-A介导的抗过氧化氢诱导的皮层神经元凋亡的机制。方法：1.黄芩苷对右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）/再灌注损伤大鼠脑神经功能、脑梗塞体积的影响：36只雄性成年SD大鼠（250-300g）随机分成6组：黄芩苷低中高剂量组（50，100和200mg/kg，腹腔注射）、尼莫地平组（阳性对组，0.4mg/kg，腹腔注射）、模型组（等量生理盐水、腹腔注射）及正常对照组（等量生理盐水、腹腔注射）。在行MCAO手术前，按分组要求分别腹腔注射黄芩苷及生理盐水，连续给药3天。3天后，对模型组、黄芩苷高中低剂量组及尼莫地平组大鼠进行MCA

4、O手术。2小时后，抽出尼龙丝进行24小时再灌注。用Longa法对大鼠进行神经功能缺损评分；取脑组织，用TTC染色评价脑梗塞体积损伤程度；采用Westernblot和RT-PCR检测脑组织中BCL-2及MCL-1表达水平；采用免疫荧光法检测脑组织中MRTF-A的表达。2.黄芩苷激活MRTF-A介导抗过氧化氢（H2O2）诱导神经元凋亡作用及机制：转染MRTF-AsiRNA至体外培养大鼠原代皮层神经元，48小时后，用黄芩苷（0.7μM、1.4μM、2.8μM）干预神经元。24小时后，用H2O2（800μM）处理细胞30min。采

5、用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，用Westernblot和RT-PCR检测BCL-2及MCL-1表达水平，以此在细胞水平证明黄芩苷抗H2O2诱导神经元凋亡作用是通过MRTF-A激活BCL-2及MCL-1的表达实现的；在此基础上，构建启动子含CArGbox的BCL-2-luc及MCL-1-luc及其突变体mutBCL-2-luc及mutMCL-1-luc报告基因质粒，并转染至体外培养大鼠原代皮层神经元中，48小时后，用黄芩苷（0.7μM、1.4μM、2.8μM）干预神经元。同样用H2O2（800μM）处理细胞30min

6、。采用荧光素酶检测法检测其活性，以此证明黄芩苷介导MRTF-A的转录激活作用与MRTF-A作用于BCL-2及MCL-1启动子上的CArGbox有关。3.黄芩苷激活MRTF-A介导的抗H2O2诱导神经元凋亡作用及对BCL-2及MCL-1基因的转录激活作用可能与其激活PI3K、ERK1/2信号通路有关：体外培养大鼠原代I万方数据皮层神经元，转染BCL-2-luc及MCL-1-luc及其突变体报告基因质粒至皮层神经元中，48小时后，用PI3K抑制剂（LY29004）和ERK1/2（PD98059）处理细胞。12小时后，用黄芩苷（

7、0.7μM、1.4μM、2.8μM）干预细胞。24小时后，用H2O2（800μM）处理细胞30min。采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率；Westernblot检测MRTF-A表达水平；采用荧光素酶检测法检测BCL-2-及MCL-1-luc活性。结果：1.在整体水平证明了黄芩苷能减少MCAO/再灌注引起的大鼠脑组织损伤：大鼠脑MCAO2h再灌注24h后，TTC染色显示黄芩苷（100和200mg/kg）处理组大鼠脑梗3死区体积分别为20.71±9.79和11.55±5.09mm，模型组脑梗死区体积为39.34±37.32

8、mm，与模型组比较，黄芩苷组脑梗死区体积明显减小（p<0.05或p<0.01）；Longa法神经功能缺损评分显示：黄芩苷（100和200mg/kg）处理组评分明显低于模型组（p<0.05或p<0.01）；Westernblot和RT-PCR检测结果表明，与模型组相比较，黄芩苷（100和200mg/kg）