华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究及n蛋白单克隆抗体的制备

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1、分类号河南农业大学硕士学位论文密级论文题目：华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究及N蛋白单克隆抗体的制各英文题目：MolecularEpidemiologyInvestigationofPRRSVinSouthChinaandPreparationofMonoclonalAntibodiesagainstNProtein学位申请人：毖至态导师：塞篮缱婴窥员夏垩塞教援专业：亟随兽医堂研究方向：查盒疫痘筮王疸丞堂论文提交日期：20l3．5学位授予日期：2013．5致谢时光荏苒，岁月如梭，转

2、眼研究生三年的生活和学习即将结束，在这里我要感谢支持和帮助过我的老师、同学、家人和朋友们。本文是在我尊敬的导师宋长绪研究员和夏平安教授的悉心指导下完成的。三年的生活和学习，两位恩师帮助我解决了许多生活和学习上的困难，这令我一生难以忘怀。恩师博大精深的学识，热情待人和严于律己的生活原则，兢兢业业的工作态度，平易近人的品德以及爱生如子的高尚师德使我由衷敬佩。在论文即将付梓之际特向两位恩师致以最崇高的敬意和最衷心的感谢!本论文是在广东省农业科学院兽医研究所猪病研究室完成的，在开题及中期考核时，师兄蒋志勇

3、、蔡汝建、张乐宜、梁鹏帅，师姐李艳、孙瑞芹、刘燕玲，同学吴坚文、冷章明，师妹孟张丽，师弟王栓群等给予了无私的帮助和关怀，本人在此表示感谢。感谢广东省农业科学院兽医研究所给我提供生活和学习的条件，感谢孙铭飞副研究员，戚南山等在在实验上的帮助和指导。感谢导师组崔保安教授、吴志明研究员、张红英副教授、赵军教授、授、王学兵副教授、王文泉等副教授的教诲和关怀!向哺育和培养我的母校和传授我知识的全体老师致以崇高的敬意，处、院党总支、院行政的领导和老师们表示衷心的感谢!菅复春副教向校研究生感谢好友以及牧医工程学

4、院2010级其他研究生，感谢你们给予我的帮助和支持!特别感谢我的父母、妹妹以及所有亲人，感谢他们为我的求学之路做出的巨大牺牲和最无私的奉献!最后，向三年来所有关心、支持和帮助过我的人们表示崇高的敬意和衷心的感谢，我所取得的一切进步都归功于你们!目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1猪繁殖与呼吸综合征概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2流行病学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3病原学⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3．】PRRSV病原学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3．2PRRSV基冈组结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一3．3病毒基冈组所编码的蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4PRRSV的致病机理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5猪繁殖与呼吸综合征疫曲的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯试验一华南地I叉：PRRSVNSP2与ORF5基冈的遗传变异分析⋯⋯⋯一l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1．

6、1细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1．2试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1．3引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I．4血清⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1．5病毒总RNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1．6RT-PCR检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1．7测序与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2结果与分析⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．1RT-PCR检测PRRSV⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．2序列测定及同源性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．2．1NSP2基冈核菅酸序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．2．2ORF5基因核苷酸序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2．2．3ORF5基因推导的氨基酸序列比对⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3小结与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯试验二猪蓝耳病病毒XF株的分离纯化及基因组测序分析⋯⋯⋯⋯

8、．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯J卫■4矗“一m¨BM"堪加1．I细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．201．2{式剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．201．3引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．201．4病毒总RNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯