吗啡依赖、戒断大鼠不同脑区肌动蛋白重构及其机制研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，实验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签字：师签章厂躲5字级学院签章．2,ob年0弓月粥日研究生学位论文独创声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果，

2、指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。厂糯乡嗲勺l弓年D>月珂日目录中文摘要⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9研究论文吗啡成瘾戒断对大鼠神经细胞骨架肌动蛋白重构的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18刚吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．97结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯100参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．100综述肌动蛋白结合蛋白

3、cofilin研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．115中文摘要吗啡依赖、戒断大鼠不同脑区肌动蛋白重构及其机制研究摘要目的：阿片类药物都有滥用并最终发展到成瘾的共同重要特征。目前大量研究表明反复使用成瘾药物可引起与情感动机，奖赏和学习有关的脑区神经元树突棘的结构产生持久改变，提示成瘾药物诱导突触联系发生了可塑性变化。在树突棘可塑性变化以及神经元形态的改变过程中，骨架肌动蛋白发挥着重要的作用。在骨架肌动蛋白的重构过程中，吗啡发挥着怎样的作用及其作用机理目前尚未阐明。本实验从骨架肌动蛋

4、白入手，结合整体动物行为学、分子细胞生物学等方法，深入的研究吗啡成瘾及戒断对大鼠骨架肌动蛋白重构产生的影响，进一步深化了对阿片类药物成瘾的分子生物学机制的认识。方法：1急性吗啡处理大鼠模型制备：健康SD雄性大鼠9只，体重(200±209)，按随机分组原则分为对照组，吗啡45分钟组，吗啡2小时组，每组3只。对照组腹腔注射生理盐水，吗啡组腹腔注射吗啡剂量均为lOmg．k91。吗啡45分钟组在给药后第45分钟断头取脑，2小时组2小时时断头，对照组在相应时间取脑，分离相关脑区。2脑室内注射y-27632模型制备：根据急性处理结果显示，腹腔注射吗啡在45rain时变化最为

5、显著，故阻断时间为45min。脑室内注射阻断剂y-27632O．5mg．kg～，10min后腹腔注射吗啡10mg．kg～，45rain后断头取脑，分离相关脑区。3吗啡成瘾大鼠模型制备：健康SD雄性大鼠24只，体重(2004-20g)。按随机分组原则分为A吗啡依赖组，B吗啡依赖对照组，C吗啡戒断组，D吗啡戒断对照组，每组6只。吗啡依赖组及吗啡戒断组采用剂量递增法腹腔注射盐酸吗啡建立吗啡依赖模型，每日2次，连续7d，日剂量按5、10、15、20、25、30、35mg．kg‘1逐日递增，对照组给予等体积的生理盐水。第8日，AB两组直接断头取脑，分离相关脑区，CD两组注

6、射纳洛酮5mg．kg～，在注射后30min内观察戒断反应并记录，观察完成后立即断头取脑分离相关脑区。4大鼠脑室内注射模型制备：健康SD雄性大鼠12只，体重(200±1中文摘要209)，按照随机分组对照原则分为A对照组，BMK．801组，CFK．506组，D小分子肽MN．16(P)(MASPGVAVSDGVIKVFN)组，每组3只。分别利用鼠立体定位系统在侧右脑室内埋入给药套管。给药时A，B，C，D组分别于脑室内注射生理盐水5旺、MK．801O．5mg．kg～、FK．506O．05mg．kg-1、MASPGⅥⅣSDGVIKVFNO．5mg．kg-1，脑室注射10m

7、in后采用剂量递增法腹腔注射盐酸吗啡，每日2次，连续7d，日剂量按5、10、15、20、25、30、35mg．kgd逐日递增，第8日断头取脑，分离相关脑区。5Western．blot的方法检测组织中肌动蛋白及其结合蛋白的水平。成瘾相关脑区组织匀浆提取总蛋白，测定其中cofilin、P—cofilin、P．LIMK、LIMK、SSH、drebrinA／E、cortactin以及B．actin。根据G．actin属于胞浆可溶性蛋白，F．actin为细胞骨架相关蛋白，采用不同缓冲液对这两种蛋白进行分步提取，分别检测其中drebrinAfE、cortactin以及G．a

8、ctin、F．actin