福建省h3n2亚型流感病毒分子流行病学特征的分析

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1、万方数据目录中文摘要1英文摘要2主要英文缩写词3第一部分引言4第二部分流感病毒概述41.流感病毒的结构特点和类型42.流感病毒的命名63.流感病毒基因和功能64.流感病毒的复制95.流感病毒的抗原性变异96.流感病毒分子流行病学研究进展10第三部分福建省流感监测数据分析131.监测内容和监测方法132.监测情况132.1流感样病例报告情况132.2流感病毒分离情况152.3流感样病例聚集性事件监测163.讨论17第四部分福建省H3N2亚型流感病毒分子流行病学特征分析191.材料191.1标本来源191.2主要试剂和用品201.3主要仪器211.4主要溶液配制2

2、12.方法222.1MDCK细胞传代222.2流感病毒MDCK细胞分离23万方数据2.3流感病毒鸡胚接种与收获232.4红细胞凝集试验（HA）242.5制备4个血凝单位抗原252.6红细胞凝集抑制试验（HAI）鉴定未知病毒252.7福建省H3N2亚型流感病毒HA1区基因扩增262.8基因序列拼接和分析比较293.结果293.1福建省H3N2亚型流感病毒分离鉴定结果293.2福建省H3N2亚型流感病毒HA1区基因PCR扩增结果303.3福建省H3N2亚型流感病毒HA1区基因测序结果313.3.1同源性结果比较323.3.2基因进化树分析结果333.3.3氨基酸序

3、列分析结果364.讨论414.1核苷酸和氨基酸同源性与进化树分析414.2HA1抗原性分析424.3HA1蛋白上二硫键和糖基化位点分析444.4疫苗保护效果分析455.结论46参考文献48附录51致谢58万方数据福建省H3N2亚型流感病毒分子流行病学特征分析摘要为了了解福建省H3N2亚型流感病毒基因进化过程，从分子生物水平上认识其变异特征和规律，并分析疫苗对福建省人群保护的效果，本次研究对1996~2011年福建省流感监测情况进行了描述，同时选用了64株分布于1996~2011年间的福建省H3N2亚型流感毒株来进行分子流行病学特征研究。首先通过MDCK细胞和鸡

4、胚分离的方法来扩容病毒量少的病毒株，采用红细胞凝集（HA）和红细胞凝集抑制（HI）试验来对病毒株进行鉴定和分型，其次通过PCR和测序方法获得64株H3N2亚型流感病毒HA1区序列，最后运用生物信息学和统计学软件来分析获得的序列资料，在此基础上进行分子流行病学研究，结合监测数据来揭示H3N2亚型流感在福建省的流行规律和特征。结果显示，福建省流感流行存在冬春季和夏季两个高峰，ILI%的异常增加在一定程度上可以提示流感流行的风险。1996~2011年期间，福建省流感流行优势株存在H1N1、H3N2和B型流感之间交替的规律。福建省1996年以来的H3N2亚型流感病毒基

5、因进化可以分为两个谱系，1996~2000年谱系和2002~2011年谱系，其进化规律都是沿着树枝主干随着时间推移向上延伸，序列的差异和年代成正比，初步判断2000~2002年福建省H3N2亚型流感病毒抗原性发生较大转变。1996年以来福建省H3N2亚型流感病毒HA1区共计在91个位点出现过变异，其中有25个氨基酸位点变异发生5个抗原决定簇上；7个变异位点发生在受体结合位点（RBS）及其附近；59个变异位点发生在抗原决定簇和RBS以外的位点，其中13个位点变异涉及年代间流感毒株的转换，值得高度关注。与WHO推荐疫苗株比较，1996~1999年和2005~200

6、9年疫苗对福建省H3N2亚型流感的保护效果较好，而2000~2004年疫苗保护效果不佳，存在滞后现象。从HA1蛋白结构上分析，1996~2011年潜在糖基化位点有增多的趋势，而5个二硫键位点氨基酸密码子仍然保守，这均为维持HA蛋白的结构稳定起到重要作用。本次研究较详细地对1996~2011年福建省H3N2亚型流感病毒进行分子流行病学分析，阐明了HA1基因的特征和进化情况，结合福建省流感日常监测可为我省流感流行的预测、传染源追踪、疫苗筛选和流感防控提供科学依据，同时为今后进一步开展流感分子生物学研究奠定重要基础。关键词：流感；H3N2亚型；HA1基因；进化；分子

7、流行病学1万方数据MolecularEpidemiologicalCharacteristicsofH3N2SubtypeInfluenzaVirusStrainsfromFujianProvince,1996-2011AbstractInfluenzavirusstrainsofH3N2subtypehavebeensporadicallyisolatedinseasonalinfluenzaspecimensfromFujianduringthepastsurveillanceseasons.Inthisstudy,thesurveillanceofinf

8、luenzawasdescribedi