ibrv对牛单核巨噬细胞表达细胞因子的影响

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1、分类号S852.62学校代码10129UDC11.220学号2010201041IBRV对牛单核巨噬细胞表达细胞因子的影响TheEffectsofIBRVonExpressionofCytokineofBovineMonocyte-Macrophage申请人：陈玉惠学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：动物传染病诊断与防治指导教师：希尼尼根副教授论文提交日期：二〇一三年六月摘要牛传染性鼻气管炎（Infectiousbovinerhinotracheitis，IBR）是一种牛的具有潜伏感染和持久感染特点，并能引起牛多系统感染的急性接触性传染病。本试验从牛外周血分离培养单核巨噬细胞，并对其进

2、行形态学观察和流式细胞术鉴定；应用绝对荧光定量PCR方法检测牛传染性鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus，IBRV）在单核巨噬细胞内的增殖规律；通过相对荧光定量PCR方法对牛单核巨噬细胞体外感染IBRV后，0、6、12、24及48h时表达IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ等细胞因子mRNA转录水平进行分析。试验结果如下：（1）通过密度梯度法分离培养的贴壁细胞，经过形态学观察和流式细胞术鉴定，确认为单核巨噬细胞。（2）IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后，在前6h增殖最快，之后增殖相对比较缓慢，在96h达到峰值，之后随着时间的增

3、加，IBRV在巨噬细胞中的含量开始降低。（3）IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后，可以显著降低IL-4、IL-6和IL-8的mRNA转录水平（P<0.05）。（4）IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后，可以显著升高IL-10及TNF-ɑ的mRNA转录水平（P<0.05）。本试验通过检测IBRV感染单核巨噬细胞后，IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ等细胞因子表达水平的动态变化，分析IBRV对牛单核巨噬细胞免疫学功能的影响，为进一步研究IBRV致病机理提供依据。关键词：IBRV；单核巨噬细胞；流式细胞术；细胞因子TheEffectsofIBRVonExpressionofCyt

4、okineofBovineMonocyte-MacrophageAbstractInfectiousbovinerhinotracheitis（IBR）cancausemultiplesystemacutecontagiousdiseasewithcharacteroflatentandpersistentinfections.Thisstudyseparatedandculturedadherentcellsfrombovineperipheralbloodandthenidentifiedthembymorphologicalobservationandflowcytometry.Thep

5、roliferationmechanismofIBRVinmononuclearmacrophagewasdetectedbyabsolutefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(PCR);ThetranscriptionallevelofIL4,IL-6,IL-8,IL-10andTNF-ɑ,wereanalyzedbyrelativefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(PCR)afterbovinemononuclearmacrophagebeinginfectedwith

6、IBRV0,6,12,24and48hinvitro.Theresultsareasfollows:(1)Theculturedadherecellsseparatedbydensitygradientseparationmethodwereidentifiedasmononuclearmacrophagesbymorphologicalobservationandflowcytometry.(2)After6hwhichIBRVinfectedmononuclearmacrophages,IBRVgrewfastestandthenthegrewingspeedwasincrementisr

7、elativelyslowandat96hitreachedapeakvalue,withthetimegoingby,theconcentofIBRVbegantodecreaseinmacrophages.(3)TheinfectionofIBRVwithmononuclearmacrophagescansignificantlydecreasemRNAexpressionlevelofIL-