叶酸和可激活穿膜肽共同修饰的多西他赛纳米脂质载体抗肿瘤靶向研究

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1、博士研究生学位论文论文题目：叶酸和可激活穿膜肽共同修饰的多西他赛纳米脂质载体抗肿瘤靶向研究姓名：高玮学号：1011111098院（部）：药学院专业：药剂学导师：齐宪荣教授完成时间：二O一三年五月Ph.DDISSERTATIONFolateandactivatablecell-penetratingpeptide(ACPP)dual-modifieddocetaxelloadednanostructuredlipidcarrierfortumor-targetedtherapyPh.DCandidate:WeiGaoSupervisor:Prof.Dr.Xian-R

2、ongQiInstitution:DepartmentofPharmaceutics,SchoolofPharmaceuticalSciences,PekingUniversityMay2013姓名：高玮院系：药学院学号：1011111098北京大学医学部学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签

3、名：日期：年月日学位论文使用授权说明（必须装订在提交学校图书馆的印刷本）本人完全了解北京大学医学部关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容；学校可以为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。请选择图书馆发布时间:□即时发布□一年发布□二年发布（保密论文在解密后遵守以上规定）论文作者签名：导师签名：日期：年月日北京大学博士

4、学位论文叶酸和可激活穿膜肽共同修饰的多西他赛纳米脂质载体抗肿瘤靶向研究叶酸和可激活穿膜肽共同修饰的多西他赛纳米脂质载体抗肿瘤靶向研究博士研究生：高玮导师：齐宪荣教授北京大学药学院药剂学专业中文摘要多西他赛，属于紫杉烷类抗癌药物，临床对于乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、头颈癌等癌症具有显著疗效。市售注射制剂采用吐温-80和乙醇做助溶剂，易产生溶血和过敏等不良反应，这些因素限制了多西他赛在临床治疗中的应用。针对上述问题，本研究设计构建一种可被肿瘤组织分泌的基质金属蛋白酶MMP-2/9所激活的细胞穿膜肽（activatablecell-penetratingpeptide

5、，ACPP）和叶酸双重修饰的新型多西他赛纳米脂质载体，提高多西他赛抗肿瘤效果，同时降低毒副作用。首先，成功设计了兼具肿瘤组织靶向传递和细胞高效穿透功能的ACPP，该结构分为三个部分：包括聚阳离子域（细胞穿膜肽部分）、底物肽域（MMP-2/9酶可裂解部分）、聚阴离子域（衰减肽部分）。采用HPLC法，对ACPP的酶解行为进行研究。通过亲核取代反应和迈克尔加成反应成功合成了DSPE-PEG2000-ACPP、DSPE-PEG2000-CPP和DSPE-PEG5000-Folate。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）证实了产物的生成。采用乳化-超

6、声法制备了PEG化的CPP，ACPP，ACPP和叶酸共同修饰的多西他赛纳米脂质载体。以香豆素-6作为体外细胞水平的示踪剂，制备了包载香豆素-6的被动靶向和主动靶向的纳米脂质载体，进行了制剂体外细胞水平的定性和定量研究。以羰花青荧光染料DiR为近红外探针，制备了包载DiR的各组纳米脂质载体，用于活体成像实验，研究给药系统肿瘤靶向和组织分布情况。所制备的纳米脂质粒径为30-40nm，PDI小于0.15，粒径小且分布均一，包封率均在95%以上，4℃放置1个月内稳定性良好。差示扫描量热法证明药物被包裹在纳米脂质载体中，制剂的相对结晶度有所减低，内部结构中不规则的无定形态比

7、例I北京大学博士学位论文叶酸和可激活穿膜肽共同修饰的多西他赛纳米脂质载体抗肿瘤靶向研究有所增加，体外释放结果显示，多西他赛纳米脂质载体具有明显的缓释特征。选择高表达叶酸受体的KB细胞，具有一定叶酸受体表达的MCF-7细胞，没有叶酸受体表达的A549细胞以及过度分泌基质金属蛋白酶MMP-2/9的HT-1080细胞作为模型，对PEG化的叶酸以及ACPP修饰的多西他赛纳米脂质载体的体外活性进行评价。通过流式细胞仪考察叶酸和ACPP对纳米脂质载体细胞摄取能力的影响，通过激光共聚焦显微镜考察制剂在细胞内的定位和分布，初步探讨纳米脂质载体细胞内化的机理。研究发现，ACPP与叶

8、酸共同介导