连续性血液滤过对多脏器功能衰竭患者血清诱导的血管内皮细胞凋亡及内质网应激的影响

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1、连续性血液滤过对多脏器功能衰竭患者血清诱导的血管内皮细胞凋亡及内质网应激的影响周洪文，甘华，杜晓刚，李正荣（400016重庆，重庆医科大学附属第一医院肾内科）[摘要]目的探讨连续性静脉静脉血液滤过(continuousveno-venoushemofiltration，CVVH)对多脏器功能衰竭（multipleorgandysfunctionsyndrome，MODS）患者血清体外诱导的脐静脉内皮细胞凋亡及内质网应激的影响及其机制。方法分别用10例健康志愿者的血清及10例MODS患者CVVH治疗前、治疗6h、治疗20h的血清体外诱导人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalv

2、einendothelialcells,HUVEC）24h，TUNEL法检测HUVEC细胞凋亡率，免疫荧光观察细胞GRP78蛋白表达，RT-PCR检测细胞GRP78、CHOP、TNF-α、IL-6mRNA表达，比色法检测健康志愿者及CVVH治疗不同时间组血清中SOD活性、MDA含量。ELISA法检测检测健康志愿者及CVVH治疗不同时间组血清中TNF-α、IL-6含量。结果与健康对照组相比，CVVH治疗前组细胞凋亡率明显升高（P<0.01），GRP78、CHOP、IL-6、TNF-αmRNA表达量也显著增高（P<0.01）。与CVVH治疗前比较，CVVH治疗6、20h组细胞凋亡率明显

3、下降（P<0.01），GRP78、CHOP、IL-6、TNF-αmRNA表达量明显减少（P<0.01），治疗20h组较治疗6h组进一步减少（P<0.05）。免疫荧光显示健康对照组GRP78蛋白表达量很少，CVVH治疗前组GRP78蛋白表达量明显高于健康对照组，治疗6h组较治疗前组明显减少，治疗20h组较治疗6h组进一步减少。与健康对照组比较，CVVH治疗前组血清SOD活性明显下降（P<0.01），MDA含量明显增高（P<0.01），血清中TNF-α、IL-6含量也明显增高（P<0.01）。经过CVVH治疗，SOD活性明显升高（P<0.01），MDA含量明显下降（P<0.01），TN

4、F-α、IL-6含量也明显下降（P<0.01）。结论MODS患者血清体外诱导的HUVEC细胞凋亡与内质网应激有关，CVVH治疗能减轻氧化应激，清除炎症介质，减轻内质网应激程度，从而减少内质网相关的凋亡。[关键词]内质网应激；血液滤过；多脏器功能衰竭；内皮细胞[中图法分类号][文献标志码]：AImpactofcontinuousvenovenoushemofiltrationonendoplasmicreticulumstressandapoptosisofHUVECcellsinducedbyserumofpatientswithmultipleorgandysfunctionsy

5、ndromeZhouHongwen,GanHua,DuXiaogang,LiZhengrong(DepartmentofNephrology,FirstAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectandimplyingmechanismofcontinuousveno-venoushemofiltration(CVVH)onendoplasmicreticulumstress(ERS)andapoptosis

6、ofHUVECcellswhichinducedbyserumofpatientswithmultipleorgandysfunctionsyndrome(MODS).MethodsTenpatientswithMODSwhoreceivedCVVHand10healthyvolunteerswereinvolvedinthisstudy.Thisexperimentwasdividedinto4groups:healthycontrol,groupofpre-CVVH,groupof6-hour-CVVHandgroupof20-hour-CVVH.Serumofhealthyv

7、olunteersandtheseraofpatientswithMODSatpre-CVVH,6-hour-CVVHand20-hour-CVVHwereusedtoinducedHUVECcellsrespectivelyinvitrofor24h.ThecellapoptosiswasexaminedbyTUNELassay,theintracellularGRP78proteinwasobservedbyimmunocytochemistry,andthemR