基于趋磁细菌磁小体的线粒体主动靶向纳米mr探针的制备及其在三阴性乳腺癌细胞的mr成像研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文基于趋磁细菌磁小体的线粒体主动靶向纳米MR探针的制备及其在三阴性乳腺癌细胞的MR成像研究ThestudyofMRimagingintriplenegativebreastcancermodelbyanovelnanoparticlemitochondriatargetingprobegestatedbymagnetotacticbacteriaBmagnetosomes课题来源：自选学位申请人o’'导师姓名专业名称Yo⋯●●培养类型培养层次所在学院’'，．●-卜．¨-5长微徵许乙凯教授影像医学与核医

2、学全日制科研型博士博士研究生研究生学院2013年3月20日广州博士学位论文IIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2406492基于趋磁细菌磁小体的线粒体主动靶向纳米探针的制备及其在三阴性乳腺癌细胞的MR成像研究博士研究生：张薇薇指导教师：许乙凯教授摘要趋磁细菌磁小体以其独特的结构和新奇的性质，得到了广大科研工作者的青睐，成为近十几年来化学、物理学、材料学和生物学研究的热点之一。本文以趋磁细菌AMB．1及其磁小体为研究对象，着眼于其修饰后的主动靶向性和水溶性衍生物在生物领域的应用之一——高效磁共振成像(MRI)造影剂，制备了新型的

3、具有潜在细胞靶向性检测功能的磁共振成像造影剂，研究了其水质子弛豫效率和稳定性，取得了一系列有意义的结果。目的：1．制备出纳米级生物材料聚乙二醇(PEG)包裹的主动靶向线粒体细胞色素C的磁小体，PEG．cBMP；2．体外检测PEG．cBMP在三阴性乳腺癌细胞株MDA．MB．231的主动靶向性及其MR成像检测。材料与方法：1．大量培养趋磁细菌AMB．1菌株，通过(高分辨力)透射电子显微镜(TEM)及能谱电镜验证其体内是否存在磁小体及其成分检测；进一步通过离心、细菌破碎、反复洗涤、磁铁吸附等方法逐步提取、纯化磁小体并做酬线衍射(XRD)、

4、能谱仪(EDS)、傅里叶红外变换光谱(FT-IR)、磁滞回线(hysteresisloop)、zeta电位、电感耦合等离子体质谱(ICP．MS)、透射电子显微镜(TEM)、原子吸收光谱(AAS)等方法对其纳米结构及理化性质进行表征；2．将可以主动靶向线粒体且带有荧光物质AlexaFlour647的细胞色素C引物与磁小体(BMP)通过自组装法结合，制备出复合物Cytc．BMP(cBMP)并进中文摘要行表征；3．通过1．乙基．3．(3．二甲基氨丙基)．碳化二亚胺(EDC)和N．羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联剂交联的方法将两端分别修饰甲氧基

5、、羧基且分子量为2000Da的PEG，即M．PEG．COOH2000与c．BMP连接，制备出具有更好生物相容性、长效性的PEG．cBMP，并进行表征；4．将制备出的PEG．cBMP与三阴性乳腺癌细胞株MDA．MB．231共同孵育，再分别转染针对线粒体和细胞核的荧光试剂一一Mito．trackergreen和Hochest33342，通过激光共聚焦显微镜及透射电子显微镜检测PEG．cBMP的主动靶向性并做MR成像；并检测PEG．cBMP对水质子的弛豫效率及成像效果。统计学方法：采用统计软件SPSSl3．0做4x6析因设计的方差分析统计

6、学处理，分析不同药物浓度与不同时间点下对MDA．MB．231细胞株增殖的影响。PEG．cBMP浓度与MDA．MB．231细胞株信号之间的关系做线性回归(LinearRegression)分析，得到R2弛豫率。结果：1．通过透射电子显微镜、能谱仪、傅里叶红外变换光谱、磁滞回线、zeta电位、电感耦合等离子体质谱及酬线衍射等上述一系列表征方法证明，我们已经成功制备出PEG．cBMP；2．与三阴性乳腺癌细胞株MDA．MB．231共同孵育，通过CCK8法检测细胞增殖能力的影响中，采用统计软件SPSS13．0，行4x6析因设计的方差分析，得出

7、(1)CCK8法检测标记不同药物浓度PEG．cBMP颗粒对MDA．MB．231细胞增殖的影响差异有统计学意义(F=14．855，P

8、分别为F=30．618，P