乌司他丁对热打击大鼠肺损伤的保护作用

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文乌司他丁对热打击大鼠肺损伤的保护作用Protectiveeffectsofulinastatinonlunginjurycausedbyheatstressinrats课题来源：南方医科大学南方医院院长基金学位申请人田培导师姓名秦再生副教授专业名称麻醉学培养类型专业型培养层次硕士研究生所在学院第一临床学院2013年5月9日硕士学位论文舢删川Ⅲ洲圳咖l㈨㈣Y2405532乌司他丁对热打击大鼠肺损伤的保护作用硕士研究生：田培指导教师：秦再生副教授摘要研究背景：随着全球气温变暖和热浪袭击强度和频率的不断增加，热射病(HcatsUokc，HS)的发病率逐年上升，

2、已经成为临床常见的危重症之一，如得不到及时妥善的救治，死亡率高达40％至50％。热射病造成组织损伤及器官功能障碍的机制至今未明，早期认为主要是热应激个体体温调节中枢功能紊乱、急性期反应加重和热应激蛋白(heatstressprotein，HsP)!表达异常三个方面单独或协同的作用结果，目前普遍认为是热打击的直接损伤及热损伤后继发的全身炎症反应综合征(SystemicInflammatoryResponseSyndrome，SIRS)引发的多器官功能障碍综合征(MmtipleOrganDysfunctionSyndrome,MODS)的过程。乌司他丁是从人体尿液中分离纯化的一种胰蛋白酶抑制

3、剂，属于Kunitz型的丝氨酸蛋白水解酶抑制剂，它包含了一个糖基化区域和两个Kunitz型活性功能域，其中糖基化区域能够稳定溶酶体、抑制炎性细胞因子释放，两个Kunitz型活性功能域均有很广的抑酶谱，能够抑制组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、纤溶酶等多种水解酶的活性，同时U11代谢形成的低分子成分也具有抑制水解酶的作用，因此UTI能抑制体内多种蛋白、糖和脂类水解酶的活性，清除氧自由基，稳定溶酶体膜，抑制多种炎性介质的过度释放，从而改善微循环、减少组织缺血再灌注损伤，阻断SIRS／MODS的进程，现已广泛应用于急性胰腺炎、感染性休克、DIC的治疗，具有明显的脏器保护功能。目的：我们希望通过高热打击

4、复制热射病大鼠动物模型，一方面观察高热对大鼠肺组织的损伤特点；另一方面研究不同时间给予乌司他丁干预是否对高热造成的肺损伤具有保护作用，从而指导热射病患者的临床治疗实践。摘要材料和方法：1．动物及分组健康清洁级雄性SD大鼠60只，体质量180～220g，随机分为5组，每组12只。(1)C组(正常对照组)：将大鼠置于常温中不给予乌司他丁干预(2)H组(高温不给药组)：大鼠热打击处理但不给予乌司他丁干预(3)HU组(高温乌司他丁预处理组)：大鼠热打击前给予乌司他丁5x104U／kg(4)HUl组(高温开始1小时后给药组)：大鼠热打击1小时时给予乌司他丁5×104U／kg(5)n02组(高温开始

5、2小时后给药组)：大鼠热打击2小时时给予乌司他丁5×104U／kg2．动物模型的制备大鼠用3％戊巴比妥钠按45mg／l(g腹腔注射麻醉，待麻醉成功后分离暴露出股静脉，行股静脉穿刺置管术，大鼠放入具备生物氧供给的加温舱之前检测肛温作为基础值，然后将其放入温度为35"C、湿度60％的动物舱中加热，加热开始时、加热1小时、加热2小时按分组情况经股静脉给予相应药物(溶于生理盐水)或同等量生理盐水(加热开始时、加热1小时、加热2小时分别给予HU组、HUl组、HU2组乌司他]-5×104U／蚝，其他两组To时给予同等量生理盐水)，加热2．5小时后将大鼠撤离动物舱并给予相应的处理。3．观察指标3．1实

6、验开始时间以To表示，加热期间每30分钟人工采集呼吸频率和肛温1次，共记录6次，分别以分别以To、T30、T60、T90、T120、T150表示。To和T150时分别采集动脉血，血气分析。3．2肺组织W／D值测定每实验组取大鼠6只，实验结束时开胸取左上肺组织，用滤纸吸除表面水分及血渍，置于称量皿中称重，记录肺组织的湿重，放入80"C恒温烤箱内烤72hII硕士学位论文称干重，测定W／D值。3．3肺微血管通透性的测定每组取6只大鼠按伊文思蓝含量测定法计算出肺组织EB渗出量。实验结束前30min按2ml／kg经股静脉注射2％伊文思蓝液，实验结束时开胸取部分左下肺，剪去周围组织，吸干表面水分及血

7、渍，置于称量皿中称湿重，将肺组织碾碎后按1009加入盛有lml甲酞胺溶液的试管中，置37。C恒温水箱中抽提48h，待组织中色素全部浸出，取出组织，离心10分钟，取上清液，用多光谱微孔阅读器测定在620nm波长处测定吸光度值，根据标准曲线计算出肺组织EB含量。3．4光镜标本的采集及观察高温结束时，打开大鼠胸腔，取右上肺组织浸入4％多聚甲醛内固定24h，常规洒精脱水，石蜡包埋，超薄切片，HE染色，光镜下观察病理变化并摄片。3．5电镜标本