小鼠眼球发育及神经酰胺作用机制的研究

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1、单位代码10475学号104753101455分类号R47硕士学位论文小鼠眼球发育及神经酰胺作用机制的研究学科、专业：护理学研究方向：围产期的眼科护理申请学位类别：医学硕士申请人：李雪指导教师：邓锦波教授二〇一三年五月THESTUDYOFEYEDEVELOPMENTINMOUSEANDMECHANISMOFCERAMIDEADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLiXueSuper

2、visor:ProfDengJinbo.June,2013关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人（学位论文作者）签名：201年月日关于学位论文著作权使用授权书本人经河

3、南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文（纸质文本和电子文本）以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文（纸质文本和电子文本）。（涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书）学位获得者（学位论文作者）签名：201年月日学位论文指导教师签名：201年月日摘要脊柱类动物的眼因其功能是一个非常特殊的器官，因其特殊的结构和屈光系统一直是神经发育学学科中的研究热

4、点。眼睛是由几个胚层来源的不同部分，经过一系列的诱导作用和时间，空间上的协调，所形成的一个具有精确功能的器官。眼的发育主要包括角膜、晶状体及视网膜发育，发育过程与神经细胞的迁移、增殖、分化密切相关。本课题选用C57BL/6J小鼠，对E8至P180年龄段的正常小鼠的角膜、晶状体及视网膜发育过程中神经干细胞的增殖，神经细胞的分化，细胞的凋亡以及重要调控蛋白的表达进行了系统的研究。另外，有研究表明，神经鞘磷脂合成酶2基因敲除（sphingomyelinsynthase-/-2knockout,SMS2）会造成体内神经酰胺的堆积，神经酰胺的堆积是否会影响小鼠视网-/-膜神经细胞增殖与双极细胞的发育，

5、有关这方面的研究较少。本课题选用SMS2小鼠，应用免疫细胞化学及BrdU标记增殖细胞技术，对该问题进行研究，这将有助于我们深入理解视网膜的发育及神经酰胺的作用机制。目的：探讨角膜细胞的增殖与凋亡对角膜结构修复与塑形的作用；探讨晶状体细胞增殖对晶状体发生的作用及其与细胞周期之间的关系，研究Synaptophysin蛋白在晶状体发生过程中的作用；探讨视网膜细胞增殖与细胞周期之间的关系，以及视网膜神经细胞分化和突触连接形成对感光信息传递的作用；探讨神经酰胺堆积对视网膜发育的影响。方法：本课题应用HE染色、免疫荧光和BrdU技术等技术对胚胎和出生后小鼠角膜、晶状体、视网膜进行形态学观察，对视网膜Br

6、dU和CyclinD1阳性细胞密度进行测量。结果：1.小鼠角膜的发生与细胞凋亡胚胎发育及出生后早期，角膜以实质层的发育为主。P14左右，角膜上皮细胞层开始增殖分化为两层细胞，同时内皮细胞也开始分化。至P30时，我们可以辨别出角膜的六层结构。BrdU阳性细胞主要存在实质层中成纤维细胞，出生以后也可见于角膜上皮细胞层和内皮细胞层。随着角膜发育，P10左右，其它层的BrdU阳性细胞都消失，仅存在于角膜上皮细胞层。PCNA阳性细胞在发育早期散在分布在角膜的各层，P14以后PCNA阳性细胞均匀的分布在角膜上皮细胞的基底层，并维持在稳定状态。在角膜发育I早期，在各层可见许多细胞凋亡。2.小鼠晶状体发育过

7、程中细胞增殖及Synaptophysin蛋白的表达E8左右，晶状体由最初的晶状体板分化而来，是由单层柱状上皮细胞围成的空泡，空泡再进一步分化，被原始晶状体纤维所替代，逐渐形成晶状体；BrdU和PCNA的阳性细胞主要分布在晶状体上皮细胞的前囊中央区，但P10以后BrdU阳性细胞已不在晶状体上皮细胞分布，而PCNA持续表达。CyclinD1阳性细胞在胚胎期主要在晶状体上皮细胞的赤道部表达，出生早期在晶状体上皮细胞