微小rna-27b过表达对残粒脂蛋白诱导的小鼠内皮祖细胞衰老的影响

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1、中图分类号UDCR541．461O硕士学位论文学校代码密级10533微小RNA．27b过表达对残粒脂蛋白诱导的小鼠内皮祖细胞衰老的影响TheeffectofmicroRNA．27bonmiceendothelialprogenitorcellsenescenceinducedbyremnant-·likeparticles作者学科研究学院(指导张鸣宇临床医学内科学湘雅二医院刘玲副教授论文答辩日期之!!至：￡：：鲨答辩委员会主席中南大学二零一三年五月一苓一二，半血月＼_＼名业向所师姓专方氛教原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工

2、作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：翻b亟三日期：出年』月2珀学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收

3、录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：进年!月望日本课题项目资助国家自然科学基金资助项目(30973159)硕士学位论文中文摘要微小RNA．27b过表达对残粒脂蛋白诱导的小鼠内皮祖细胞衰老的影响摘要背景内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞，有保持血管内皮细胞完整和维持正常血管内皮功能的作用。EPCs的衰老和数量减少与冠心病等缺血性心脑血管疾病的发生和发展密切相关。p161NK4a是调控干／祖细胞衰老的重要转录因子。餐后高甘油三酯血症患者血浆中的残粒脂蛋白(re

4、mnant．1ikeparticles，RLPs)能够诱导人外周血来源的EPCs衰老，剂量依赖性地上调p161NK4a的蛋白水平。微小RNA(microRNA，miRNA／miR)是一类高度保守的、由18-22个核苷酸构成的非编码单链RNA，在转录后水平负向调控靶基因的表达。已知人RLPs可促进小鼠EPCs的衰老，伴miR-27b表达显著下调。由此推测miR-27b可能参与调控RLPs诱导的小鼠EPCs衰老。目的用miR-27b模拟物(mimic)转染小鼠骨髓来源EPCs，观察miR-27b过表达对RLPs诱导的EPCs衰老过程的影响。方法密度梯度离心法

5、提取小鼠双下肢骨髓单个核细胞，4天后弃去未贴壁细胞。用EBM．2完全培养基培养至第7天后，将细胞分为miR-27b过表达组和对照组，分别转染miR-27bmimic及其对照物，24h后用0．2mg／mL的RLPs同时干预两组细胞。24h后行衰老相关．B．半乳糖苷酶(senescenseassociated—p—galactosidase，SA—p-Gal)染T硕士学位论文中文摘要色、分别计数两组衰老细胞百分率；提取总RNA，测定两组细胞中miR-27b、衰老相关基因p16咖渤的mRNA水平。结果成功分离培养出小鼠骨髓源性EPCs，使miR-27b在EPC

6、s中表达水平显著上调37倍。miR-27b过表达组的衰老细胞百分率为29．4％，对照组为2I．4％。miR-27b过表达组的衰老相关基因p161NK4a的mRNA水平低于对照组，但无统计学显著性。结论miR-27b过表达可能对RLPs诱导的小鼠骨髓源性EPCs衰老起负性调节作用，但机制还需要进一步探讨。关键词miR-27b；内皮祖细胞衰老；p161NK4a分类号R541．4硕士学位论文英文摘要TheeffectofmicroRNA··27bonmiceendothelialprogenitorcellsenescenceinducedbyremnant-

7、likeparticlesABSTRACTBaekgroundEndothelialprogenitorcells(EPCs)arebonemarrow．derivedcellsthathometositesofnewbloodvesselformationandplayanimportantroleinthemaintenanceofvascularintegrityandnormalendothelialfunction．EPCssenescenceplaysanessentialroleinthedevelopmentofatheroscleros

8、is．p161NX4aisakeyregulatorofprogenitor／s