抑制生长因子受体连接蛋白-2表达对乳癌细胞生长的影响

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1、中国药理学与毒理学杂志２００８年２月；２２（１）：５５－６２ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｆｅｂ；２２（１）：５５－６２·５５·抑制生长因子受体连接蛋白２表达对乳癌细胞生长的影响叶韵斌，陈慧菁，刘枋，李洁羽，陈强（福建医科大学福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室，福建福州３５００１４）摘要：目的进一步验证生长因子受体连接蛋白２４８ｈ后ＳＴＡＴ５相对吸光度值分别下降为（６４±６）％（Ｇｒｂ２）的表达在乳癌发展中的作用。方法应用和（５２±１４）％。结论抑制Ｇｒｂ２的表达可抑制乳脂质体转染技术将Ｇｒｂ２小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）转染癌细胞生

2、长并诱导细胞凋亡。至乳癌细胞ＳＫＢｒ３中，台盼蓝计数法测定存活细胞关键词：受体，生长因子；ＲＮＡ干扰；乳腺肿瘤；数，ＴＵＮＥＬ技术和ＡｎｎｅｘｉｎⅤ／ＰＩ染色分析转染后细胞凋亡细胞的凋亡，免疫细胞化学技术分析转染后细胞中图分类号：Ｑ７８，Ｒ９７９．１Ｇｒｂ２的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白质印迹法测定Ｇｒｂ２、细文献标识码：Ａ胞外信号调节激酶（ｐ４２／４４ＥＲＫ）、磷酸化ｐ４２／４４文章编号：１０００３００２（２００８）０１００５５０８ＥＲＫ（Ｐｐ４２／４４ＥＲＫ）、原癌基因蛋白质ｃａｋｔ（Ａｋｔ）、磷酸化Ａｋｔ（ＰＡｋｔ）和ＳＴＡＴ５转录因子表达

3、分子生物学的进步及癌症治疗研究的发展已经的改变。流式细胞术检测细胞活化的半胱氨酸天冬表明，癌症是一种多基因疾病，肿瘤的发生和发展与氨酸蛋白酶（ｃａｓｐａｓｅ）３的表达。结果台盼蓝计数癌基因的异常表达有关，许多癌基因即为细胞信号法结果显示，转染Ｇｒｂ２ｓｉＲＮＡ可有效抑制ＳＫＢｒ３的［１］传导途径中的分子。抗肿瘤药物的开发已经从生长。ＴＵＮＥＬ实验显示，Ｇｒｂ２ｓｉＲＮＡ转染ＳＫＢｒ３细传统的细胞毒性药物转向寻找与肿瘤相关的特异性胞后，随着时间延长，凋亡细胞明显增加。Ａｎｎｅｘｉｎ［２］信号通路为靶点的分子靶向药物的研究上。生Ⅴ／ＰＩ测定结果亦提示，Ｇｒｂ

4、２的抑制可明显诱导长因子受体连接蛋白２（ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｂｏｕｎｄＳＫＢｒ３细胞凋亡。转染４８ｈ后，ＳＫＢｒ３的活化ｐｒｏｔｅｉｎ２，Ｇｒｂ２）是存在于细胞内的一个衔接蛋白，ｃａｓｐａｓｅ３表达水平由０．９９％升至１７．４３％。免疫组它通过其ＳＨ２功能区与位于细胞膜上的生长因子化染色表明，Ｇｒｂ２ｓｉＲＮＡ转染细胞后，ＳＫＢｒ３细胞受体，如内皮细胞生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈＧｒｂ２表达明显下降，由转染２４ｈ后的下降至转染［３］ｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ），Ｈｅｒ２等的磷酸化酪氨酸残７２ｈ后的＋

5、～－。Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白质印迹分析证实，基相连，同时Ｇｒｂ２利用其ＳＨ３功能区，与细胞内不Ｇｒｂ２的抑制可导致ＳＫＢｒ３细胞Ｐｐ４２／４４ＥＲＫ，Ｐ［４］同信号传导分子的富含脯氨酸的位点结合，介导Ａｋｔ以及ＳＴＡＴ５表达明显下降。Ｐｐ４２ＥＲＫ与ｐ４２多条信号通路的活化。由此可见Ｇｒｂ２在细胞内信ＥＲＫ的相对吸光度值之比由未转染的（６０±１７）％号转导网络中的重要地位，尤其在启动ＲａｓＲａｆ下降至转染２４ｈ后的（３８±１３）％，及转染４８ｈ后ＭＡＰＫ信号通路中起关键的作用。在乳癌细胞，尤的（２１±８）％；Ｐｐ４４ＥＲＫ与ｐ４４ＥＲＫ的相对吸光

6、其是Ｈｅｒ２高表达的乳癌细胞中存在Ｇｒｂ２ｍＲＮＡ的度值之比，由未转染时（１０４±１６）％，分别下降至［５］过表达，Ｇｒｂ２的高表达在乳癌的发展中起重要作（４９±１３）％及（３０±１０）％；ＰＡｋｔ与Ａｋｔ的相对吸用。因此，抑制Ｇｒｂ２的功能就有可能抑制由Ｇｒｂ２光度值之比由未转染的（４０±６）％下降至（３２±［６］诱导的Ｒａｓ的活化，达到抑制肿瘤生长的目的。１０）％和（１５±４）％。与未转染组相比，转染２４及［７］ＲＮＡ干扰技术是近年来产生的新兴生物技术，是将目的基因所对应的小分子双链ＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎ收稿日期：２００７０２１３接

7、受日期：２００７１０１５ｄｅｄＲＮＡ，ｄｓＲＮＡ）导入细胞中，导致相应的ｍＲＮＡ基金项目：福建省医学创新课题资助项目（２００７ＣＸＢ１）降解，从而阻断细胞中特定基因的表达。为此，本研作者简介：叶韵斌（１９６４－），女，福建省福州市人，主任医师，主要从事肿瘤免疫学及肿瘤信号传导的研究。究应用ＲＮＡ干扰技术，封闭Ｈｅｒ２高表达的乳癌细联系作者Ｅｍａｉｌ：ｃｑｉａｎｇ８＠ｐｕｂ５．ｆｚ．ｆｊ．ｃｎＴｅｌ：胞株ＳＫＢｒ３的Ｇｒｂ２分子，观察Ｇｒｂ２表达抑制对肿（０５９１）８３６７９５９１Ｆａｘ：（０５９１）８３６３８７５７瘤细胞生长的影响。·５６·Ｃ

8、ｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｆｅｂ；２２（１）１材料与方法书