糖尿病肾病肾小管上皮自噬相关蛋白的表达研究

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1、中图分类号UDCR692．6610硕士学位论文学校代码密级10533糖尿病肾病肾小管上皮自噬相关蛋白的表达研究TheExpressionofAutophagyRelatedProteinsinRenalTubularEpitheliumofDiabeticNephropathy作者姓名：李慧学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：肖平教授中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：查塾日期：—丝丝年4曼月五生日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录

3、到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：址导师签名：址日期：皱年盟月五日硕士学位论文中文摘要摘要背景：糖尿病肾病是糖尿病最严重并发症之一，且发病率不断增加，已成为全球范围内一个严重的健康问题，故目前迫切需要寻找新的针对糖尿病肾病发病机制的靶向分子或细胞治疗机制，以期更好的防治糖尿病肾病。近期，营养过剩及ROS、内质网应激、缺氧等细胞内应激被认为糖尿病肾病的发病机制，而自噬在这些机制中起着重要作用。自噬是对多种应激的适应性反应，损伤细胞、受损细胞器及大分子蛋白质聚积都可激活自

4、噬信号通路，从而维持应激状态下细胞内环境的稳态。既往研究提示，白噬与糖尿病其他并发症密切相关，在胰岛素抵抗时，自噬明显增加，以保护胰岛p细胞免受伤害。所以我们推断，自噬在早期糖尿病肾病的发病机制中也可能起着重要作用，对糖尿病肾病有潜在保护作用。在细胞或动物实验中，LC3蛋白被认为是白噬存在的标志分子。LC3．II的多少与自噬泡数量成正比，通过检测细胞I@LC3．II的变化可以判断细胞内的自噬状态。p62蛋白，也称sequestosome1，与泛素化蛋白结合后，通过与LC3相互作用而定位在自噬体上，且不断地被

5、自噬体一溶酶体系统降解。当自噬功能减弱时，p62相关聚集体的大小和数量明显增加，p62本身的蛋白水平也明显增高。在本研究中，我们通过体内外实验，在STZ诱导的I型糖尿病肾病大鼠模型和高葡萄糖诱导的HK．2细胞模型中，检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达变化，以阐明糖尿病肾病小管细胞是否存在自噬障碍。目的：1．观察I型糖尿病肾病大鼠模型肾脏中自噬相关蛋白LC3、T1硕士学位论文中文摘要p62的表达情况。2。研究高葡萄糖对人肾小管上皮细胞(HK一2)LC3、p62表达的影响方法：1)体内实验：①建立STZ诱导的

6、I型DN大鼠模型：将20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病肾病模型组。采用尾静脉注射STZ的方法诱发SD大鼠糖尿病肾病(STZ为50mg／kg)。对照组注射相同体积的枸橼酸盐缓冲液，3天后开始测定血糖和尿糖值，当血糖值>16．7mmol／L，尿糖值为+++斟+++者可确定为糖尿病模型。成模后第八周处死大鼠，留部分肾皮质组织，4％多聚甲醛固定。②进行HE染色观察两组间肾组织病理改变。③免疫组织化学检测两组间肾组织LC3和P62蛋白表达及分布情况。④采用Pearson相关分析评判LC3、p62与STZ大鼠

7、蛋白尿、肌酐的相关性。2、)体外实验：HK-2人肾小管上皮细胞作为体外实验观察对象，常规低糖D姬M+1O％FBS培养，给予不同浓度右旋葡萄糖(10、20、30mmol／1)刺激48小时，采用WesternBlot检测各组LC3、p62蛋白表达情况。结果：1)体内实验结果：@STZ诱导的I型DN大鼠的血尿生化检测结果：血糖波动19．2．23．3mmol／1；血肌酐波动在72．5．122．7umol／1；尿蛋白波动在4．63．9．199／24h@STZ大鼠模型基本病理改变：与正常对照组相比，可见肾小球体积明显增

8、大，肾小管局灶性萎缩，小管间质造型纤维化，基底膜增厚，系膜细胞及系膜基质增多。@p63、LC3免疫组化结果：肾组织小管上皮中，p62表达明显增加，LC3表达明显下降，定量分析结果显示，STZ大鼠肾组织小硕士学位论文中文摘要管中，p62较正常组增加2．5倍，LC3下降35％(p<0．01)@p62、LC3表达与蛋白尿、血肌酐的相关性分析，提示：p62与STZ大鼠蛋白尿、肌酐呈正相关(P