龙虎人丹治疗肝纤维化作用及机制研究

《龙虎人丹治疗肝纤维化作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________龙虎人丹治疗肝纤维化作用及机制研究姓名：杨桂智学号：2111543012院系：基础学院学位类型：学术学位专业：病理学与病理生理学研究方向：肝纤维化导师：兰天副教授论文提交日期：2018年3月17日论文答辩日期：2018年5月15日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年六月广东药科大学硕士研究生学位论文StudyOfLonghuRendanEffectOnTheTreatmentOfLiverFi

2、brosisAndItsMechanismCandidate：YangGuizhiStudentID：2111543012Affiliation：SchoolofbasicAcademicDegreeApliedfor：MasterofmedicineSpeciality：PathologyandpathophysiologySupervisor：TianLanDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalU

3、niversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文龙虎人丹治疗肝纤维化作用及机制研究摘要目的：肝纤维化是各种肝脏慢性损伤因子持续刺激下，所致的病理性改变。肝纤维化是可逆的，但不控制将有可能进一步发展为肝硬化和肝癌。目前肝纤维化的防治尚无特定药物，故寻找有效的抗肝纤维化药物成为国内外制药公司的研究热点。龙虎人丹（LonghuRendan，LHRD）作为一个应用几十年的中成药，现主要用止吐防暑等，而其他方面的作用研究未见报道，本实验将其应用于治疗肝纤维化的研究，以期寻找特异的抗肝纤维化的药物。方法：

4、1.实验动物、分组及造模：四氯化碳（CCl4）模型：SPF级雄性C57BL/6小鼠30只，随机均分为3组：溶剂对照组（Oil）、模型组（CCl4）及龙虎人丹给药组（LHRD）。CCl4组和LHRD组分别腹腔注射CCl4构建慢性肝损伤及纤维化模型（每组2次，持续6周）。在此期间，LHRD组每天灌胃给予LHRD（100mg/kg）直到实验结束。胆管结扎(BDL)模型：昆明小鼠随机均分为3组：假手术组（Sham）、模型组（BDL）、龙虎人丹给药组（LHRD）。BDL组和LHRD组均采用双侧胆管结扎处理，持续15天

5、。LHRD组在BDL前先灌胃预给药2周，BDL后，继续给药治疗直到实验结束。Sham组只开腔暴露胆管，不予结扎。2.取材及样本处理：在动物实验I广东药科大学硕士研究生学位论文结束后24h，收集小鼠血样和肝脏，进行后续生化病理及分子生物学实验。结果：1.血清学指标结果显示，与对照组比较，无论CCl4组或BDL的ALT和AST均显著升高，而两种模型的LHRD组，相对于模型组，ALT和AST均明显下调，说明龙虎人丹可有效对抗两种不同模型所造成的肝损伤。2.HE和天狼猩红结果显示：LHRD组相较模型组，其肝脏的细胞

6、坏死和炎症细胞浸润明显减少，模型组胶原纤维围绕中央静脉形成假小叶的结果，而LHRD组假小叶结果已近乎消失，汇管间胶原纤维桥联明显改善。通过IHC和westernblot检测星状细胞活化标志物α-SMA的表达情况，结果显示LHRD组α-SMA的表达明显较模型组有所下调，荧光定量PCR检测发现，龙虎人丹可明显减少肝星状细胞活化与促纤维化因子的表达。上述结果说明龙虎人丹具有很好的抗肝纤维化作用。3.通过免疫组化检测肝脏巨噬细胞的标志物CD68表达发现，对比模型组，LHRD组CD68的表达明显减少，并且龙虎人丹可以

7、明显抑制肝纤维化小鼠NFκBp65的磷酸化，减轻小鼠炎症抑制肝纤维化的发生发展。4.通过检测ROS及其上游NOX4和4-HNE的表达量，对比模型组，LHRD组ROS、NOX4、4-HNE的量明显减少。结论：LHRD可显著改善小鼠肝损伤及纤维化程度，其分子机制可能与LHRD抑制肝纤维化过程中的炎症和氧化应激发生相关。关键词：龙虎人丹；肝纤维化；炎症；氧化应激II广东药科大学硕士研究生学位论文STUDYOFLONGHURENDANEFFECTONTHETREATMENTOFLIVERFIBROSISANDITS

8、MECHANISMABSTRACTAim:Hepaticfibrosisisapathologicalchangecausedbychronicliverinjuryduetovariousfactors.Theoccurrenceofliverfibrosisaffectsthenormalfunctionoflivertosomeextent,anditmayfurtherdevelopintocirrhos