影响分光光度法检测藻类叶绿素a的因素

《影响分光光度法检测藻类叶绿素a的因素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、万方数据20O7年05月沈阳建筑大学学报(自然科学版)May2007第23卷第3期Joumalofsh∞y∞gJia皿huUniversity(NaturalScience)V01．23。No．3文章编号：167l一2021(2007)03—0482一03影Ⅱ向分光光度法检测藻类叶绿素a的因素赵玉华，刘畅，薛飞，傅金祥(沈阳建筑大学市政与环境工程学院。辽宁沈阳110168)摘要：目的为检测藻类叶绿素a提供可借鉴的依据．方法采用玻璃离心管与塑料离心管，待测液样在分光光度计中稳定不同时间，在叶绿素a提取过程中对液样加以冷藏

2、的方法，进行对比试验．结果塑料离心管测得的水样叶绿素a值。比用玻璃离心管测得的值平均高30．1％．液样在分光光度计中稳定时间O～5min内，叶绿素a值随稳定时间延长而提高，5min以后提高速度减缓．冷藏时间在6h以内，叶绿素a值平均增加1．92弘g·(L·h)～，6h以后，叶绿素a值增加速度减缓．结论塑料材料对叶绿素a值测定有干扰作用，采用塑料离心管测得的水样叶绿素a值偏高，建议用玻璃离心管．待测液样在分光光度计中的稳定时间对藻类叶绿素a值的测定有影响，如果稳定时间过短，会使测定结果偏低．适合的稳定时间为10～20mi

3、n，在叶绿素a提取过程中，将液样适当进行冷藏，可使叶绿素a充分溶解于溶液中，适合的冷藏时间为6～8h，供分光光度法检测藻类叶绿素a参考．关键词：藻类；叶绿素a；分光光度法检测；离心管材料中图分类号：X832文献标识码：A水中藻类过量繁殖会使水透光性差，影响水生物生长繁殖[¨．产生藻毒素，危害生物及人类健康[2-4】．水中藻类的检测通常采用叶绿素a法和显微计数法【卜8j．国家环境保护局公布的<水和废水监测分析方法>中规定。叶绿素a的检测采用分光光度法[9】．在试验过程中发现，规定的操作过程与步骤不尽详细。使得试验结果会产

4、生一定的误差．比如，水样离心所用的离心管材料、测定吸光度时待测液样在分光光度计中的稳定时间等，都未做说明．因而，笔者进行了离心管材料、待测液样稳定时间和叶绿素a提取过程中加以冷藏的对比试验，为藻类叶绿素a的检测提供可借鉴的依据．‘1试验方法1．1试验仪器设备抽滤装置(2XZ一0．5型旋片真空泵，过滤器，直径35mm、O．45pm微孔滤膜(混合纤维)，小研钵(配套研杵)，台式离心机，冰箱，9100可见光分光光度计．1．2试验用水试验用原水取自沈阳建筑大学人工湖．该湖于2003年注入地下水，其作用除用做校园景观外，还兼养鱼

5、类．由于湖水流动性较差，光照充足，以及投放鱼食等营养物质，造成藻类繁殖，主要以蓝藻为主，湖面水呈绿色，处于富营养化状态．夏季最高水温在26℃左右，浊度4．O～6．0NTU，高锰酸盐指数的质量浓度8．22—9．45mg·L～．pH值6．55左右．1．3水样采集．因为藻类基本接近水面的浅层水中生长繁殖[¨，而且受光照条件和水温影响，因而，每天在同一时间，同一地点，同一液面深度下采集原水水样．1．4叶绿素a测定过程水样用滤膜过滤后，将滤膜放在匀浆器或小收稿日期：2006—08一tO基金项目：辽宁省水利厅项目(05—08—37

6、)作者简介：赵玉华(1959一)，女，教授，主要从事水处理理论与技术研究．万方数据第23卷赵玉华等：影响分光光度法检测藻类叶绿素a的因素483研钵内，加90％的丙酮溶液2～3mL，充分研磨，提取叶绿素a，并将浆液移入离心管中，放入冰箱冷藏一定时间，以使叶绿素a充分提取出来，温度保持在4℃．提取完毕后，以3500r／min转速离心分离10min．重复提取过程(不需再冷藏)和离心过程1次．将浆液移入比色皿内，放入分光光度计稳定一定时间。分别在750nm、663砌、645nm、630nm波长下测提取液的吸光度．用下式计算叶绿

7、素a值．P(叶绿素a)=11．64(OD663一OD750)一2．16(0D“5—0D750)+0．1(ODb30一0岛50)式中，OD为吸光度．在叶绿素a测定过程中，还需要注意以下几点．(1)在将离心管放入离心器中进行离心时，要注意离心管对称放置，譬如：1—3—5，2—4—6．否则，会引起离心不均匀，同时会对离心器产生一定的破坏．(2)在进行水样抽滤时，需注意抽滤压力不高于相当150mm汞柱的压力，否则，过大的压力会破坏藻细胞。从而带来叶绿素a测值的失真【l训．并且抽滤要在一个避光性好的室内操做，并尽快完成，避免将叶

8、绿素暴露在不必要的光中．2试验结果讨论2．1离心管材料的影响分别采用塑料离心管和玻璃离心管，对水样提取液进行离心分离，以探讨离心管材料对测定结果的影响．测得的叶绿素a值如图1所示．从图中可以看出，采用塑料离心管测得的水样叶绿素a值，始终高于同样条件下采用玻璃离心管测得的叶绿素a值，误差在21．O％～43．6％之间，平均误差30．1